• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 前のページに戻る

肝ミクロゾームメタルプロテアーゼの特異的インヒビターの精製と構造解析

研究課題

研究課題/領域番号 06680588
研究種目

一般研究(C)

配分区分補助金
研究分野 構造生物化学
研究機関九州大学

研究代表者

川畑 俊一郎  九州大学, 理学部, 助手 (90183037)

研究分担者 中川 和憲  九州大学, 医学部, 助手 (50217668)
牟田 達史  九州大学, 理学部, 助手 (60222337)
研究期間 (年度) 1994
研究課題ステータス 完了 (1994年度)
配分額 *注記
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1994年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
キーワードプロセシングプロテアーゼ / ジンクペプチダーゼ / エンドペプチダーゼ-24.15
研究概要

ウサギ肝臓約1kgより50μgのMEPが精製できるが、通常、インヒビターは、その標的酵素より量的に多く存在することから、MEPの際に用いた同程度の精製スケールでそのインヒビターも精製可能と考えられた。肝臓の界面活性剤抽出液を精製の出発物質とし、インヒビター活性をMEPの蛍光消光系ペプチド基質、Abz‐ARVRRANS‐Dnaに対する水解活性の阻害で評価しながら、イオン交換樹脂、色素カラム、ゲルろ過などの手法を組み合せて精製を進めた。実験の最中に東工大の広瀬らにより、MEPがsoluble angiotensin‐binding prtoteinと同一であることが報告された。そこで、界面活性剤を用いず、soluble angiotensin‐binding proteinの精製に用いられた疎水性クロマトグラフィーを取り入れてMEPの精製を行ったところ、ウサギ肝臓1kgから200μgのMEPが得られた。また、ホモゲナイズした肝臓の各遠心画分のインヒビター活性を調べたところ、核の画分にMEPの阻害活性が存在することが判明した。しかし、この活性は非常に不安定であった。また、MEPのニワトリ卵抗体により、MEPが脳、肺、肝臓の脈管の表皮の細胞膜に局在していることが判明したため、核に局在すると考えられるインヒビターの役割は現在のところまったく不明である。

報告書

(1件)
  • 1994 実績報告書
  • 研究成果

    (4件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (4件)

  • [文献書誌] Yoshiki Miura: "A limulus intracellular coagulation inhibitor type 2:Purification,characterization,cDNA cloning,and tissue localization." Journal of Biological Chemistry. 270. 558-565 (1995)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Shun‐ichiro Kawabata: "Structure and function of staphylothrombin." Seminars in Thrombosis and Hemostasis. 20. 345-350 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Yoshiki Miura: "A limulus intracellular coagulation inhibitor with characteristics of the serpin superfamily,purification,characterization,and cDNA cloning." Journal of Biological Chemistry. 269. 542-547 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Kishan L,Agarwala: "Activation peptide of human factor IX has oligosaccharides O‐glycosidically linked to threonine residues at 159 and 169." Biochemistry. 33. 5167-5171 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書

URL: 

公開日: 1994-04-01   更新日: 2016-04-21  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi