研究課題/領域番号 |
06760061
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研究種目 |
奨励研究(A)
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配分区分 | 補助金 |
研究分野 |
植物栄養学・土壌学
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研究機関 | 香川大学 |
研究代表者 |
横山 和平 香川大学, 農学部, 助教授 (10230658)
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研究期間 (年度) |
1994
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研究課題ステータス |
完了 (1994年度)
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配分額 *注記 |
1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1994年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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キーワード | アンモニアモノオキシゲナーゼ遺伝子 / PCR / Nitrosomonas europaea / 土壌DNA / アンモニア酸化菌 / 従属栄養性硝化菌 / メタン酸化菌 |
研究概要 |
アンモニアモノオキシゲナーゼ遺伝子(amo)を持つ、Nitrosomonas europaea、Nitrosolobus multiformis、対照としてメタン酸化菌Methylococcus capslatus(Bath)、亜硝酸生成能を持つ従属栄養細菌Bacillus subtilis、Pseudomonas aeruginosa、及び土壌から単離した細菌(未同定)2株、放線菌(未同定)1株、亜硝酸酸化菌Nitrobacter winogradskyとNitrococcus mobilisを供した。土壌から抽出・精製したDNAについても検討した。PCRに用いたプライマーは、N.europaeaのamoを基に、センス側をamoA前半とし、アンチセンスをamoA後半とamoB前半とした2組を用いた。 PCRの結果、N.europaeaからは、amoAからamoBにまたがる領域(852bp)を標的としたときに、。1Kbpと1.5Kbpの増幅産物が得られた。amoA内を標的とした場合には、890bp〜2.5Kbpまでの6本の増幅産物が得られた。増幅産物はドットブロットで陽性だったが、サザンハイブリダイゼーションでは、安定した結果が得られず、目的領域を含むバンドは特定できなかった。N.europaea以外からは増幅産物が得られなかった。土壌から抽出・精製したDNAを鋳型としてPCRしたところ、比較的亜硝酸生成能の高い土壌からN.europaeaと同様に1Kbpの増幅産物を得た。今後は、N.europaeaと土壌から得た1Kbpの増幅産物のクローニングとシークエンスを行う予定である。 以上より、amoを標的として、土壌中のN.europaeaを選択的に検出できる可能性が見いだされた。今後、他のアンモニア酸化菌やメタン酸化菌をモノオキシゲナーゼ遺伝子を標的として検出するためには、N.europaea以外のamoの塩基配列を明らかにし、保存領域や変異領域を特定することが必要である。
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