| 研究課題/領域番号 |
06807170
|
|---|
| 研究種目 |
一般研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
生物系薬学
|
|---|
| 研究機関 | 名古屋市立大学 |
|---|
研究代表者 |
今泉 祐治 名古屋市立大学, 薬学部, 助教授 (60117794)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1994 – 1995
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
|
| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1995年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1994年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
|
|---|
| キーワード | ラット胃平滑筋 / セロトニン受容体 / 卵母細胞発現系 / CHO細胞 / クローニング / 共焦点レーザー顕微鏡 / 細胞内Ca濃度 / 低分子量タンパク / ラット / 胃 / アフリカツメガエル卵母細胞 / 細胞内カルシウム濃度 |
|---|
| 研究概要 |
ラット胃平滑筋層から得た総mRNAの低分子量画分中(500-700塩基長)に、セロトニン受容体の発現に関与した遺伝子が存在することを見いだした。本研究では、アフリカツメガエル卵母細胞発現系を用いて、その遺伝子を電気生理学的手法によりクローニングし、コードされた蛋白質の実体と機能について検討した。シークエンス解析の結果、この遺伝子は90アミノ酸よりなる単一のアミノ酸翻訳領域を有しており、その推定分子量は10.4kDaであった。これはウサギ網状赤血球ライゼ-トによるin vitro翻訳産物とほぼ一致した。また、ホモロジー検索の結果、高い相同性を持つ蛋白質はこれまでのところ登録されていなかった。さらに、ノーザンブロット解析によりこの遺伝子の組織分布について検討したところ、この遺伝子が、脳・心臓・肺・骨格筋などの広範な組織にしていることが明らかとなった。機能的特性を検討するために、哺乳類動物由来培養細胞であるCHO細胞にこの遺伝子を形質移入し、選択的遺伝子マーカーであるネオマイシン耐性遺伝子を用いて形質移入した細胞を選択した。形質移入した細胞では、セロトニン投与後細胞内Ca濃度が上昇することをCa蛍光指示薬fluo-3AMと共焦点レーザー顕微鏡を利用して発見した。このセロトニンによる細胞内Ca濃度上昇は、セロトニン受容体拮抗薬であるスピペロン(100nM)により抑制され、細胞外をCa除去溶液で置換した場合には変化がなかったことから、このセロトニンによる細胞内Ca濃度の上昇は新規遺伝子産物のセロトニン受容体修飾によるものと考えられた。現在、この新規遺伝子がセロトニン受容体のサブユニットか、セロトニン受容体と細胞内情報伝達系の連関に機能するものなのか、あるいは、セロトニン受容体の転写を促進するものなのかなどを検討中である。
|
