インスリン様成長因子とその結合蛋白質との複合体の構造解析

• 研究課題/領域番号: 07224208
• 研究種目: 重点領域研究
• 配分区分: 補助金
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 小林 祐次 大阪大学, 蛋白質研究所, 助教授 (20127228)
• 研究期間 (年度): 1995
• 研究課題ステータス: 完了 (1995年度)
• 配分額: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円); 1995年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
• キーワード: インスリン様成長因子 / ^<15>N核 / 多核多次元NMR / 分子動力学計算 / 結合蛋白質BP-3 / 複合体形成

研究概要

インスリン様成長因子(IGF-I)の溶液構造を決定した。^<15>N核によるラベル化を行い多核多次元NMR法と分子動力学計算を用いてその溶液構造を精密化した。それらの溶液構造を天然体と同様に構造解析し三者を比較し構造と活性の相関を論じた。IGF-Iとその結合蛋白質BP-3の複合体形成の様式を、本研究で改良を施した超遠心機を用い、沈降平衡法で解析した。^<15>Nラベル化IGF-IとBP-3の複合体を多核多次元NMRにより解析し始めたが、冷凍保存中にBP-3が変性するという事故に遭遇した。BP-3を再調製でき次第、すぐに実験を再開し、15Nのみならず^<13>Cをも含むダブルラベルしたIGF-Iを用いて、所期の目的を果たす態勢にある。多核多次元NMRによるこのような大きな蛋白質の複合体の構造解析は未だ行われていないが、ここに予備実験は全て完了した言える。

研究成果

• [文献書誌] R. Katahira et al.: "Solution Structure of A Human Calcitonin Analog Elucidated by NMR and Distance Geometry Calculations." Int. J. Peptide Protein Res.45. 305-311 (1995)
• [文献書誌] N. Nemoto et al: "Solution Structure of ω-Conotoxin MVIIC Determined by NMR." Biochem. Biophys. Res. Commun.207. 695-700 (1995)
• [文献書誌] N. Nemoto et al: "Solution Structure of Adrenocorticotropic Hormone Fragment(1-24)" Peptide Chemistry. 1994. 81-84 (1995)
• [文献書誌] A. Aumelas et al.: "[Lys-2-Arg-1]-Endothelin-1 Solution Structure by 2D 1H-NMR: Possible Involvement of Electrostatic Interactions in the improved Disulfide Bridge Formation and in the Decreased Biological Activity." Biochemistry. 34. 4546-4561 (1995)
• [文献書誌] K. Uegaki et al.: "15N labeling method of peptides using a thioredoxin gene fusion expression system: application to ACTH-(1-2)" FEBS Letters. 379. 47-50 (1996)