| 研究概要 |
1)CRP依存プロモーターはそのCRP結合部位の位置によってCRPの作用ステップが異なることが示唆されてきた。閉鎖複合体の形成前後のステップを分離することによって、malT,lac,galの各プロモーターの転写開始反応における転写調節因子CRPの作用機構を生化学的に解析した。いずれのプロモーターにおいてもCRPはRNAポリメラーゼと協同作用的に3重閉鎖複合体を形成するが、ヘパリンを添加することにより、CRPを特異的に解離させることができた。CRPの除去に必要なヘパリンの濃度はプロモーターに依存し、閉鎖複合体の構造的性質を反映していた。CRPを除去した複合体は安定で、大きな構造変化のないことがゲルシフトとDNaseIフットプリントにより明らかになった。さらに、複合体は転写を開始、伸長させる能力を保持していた。これらの結果より、CRPおよびCRP-RNAポリメラーゼ相互作用は閉鎖複合体形成以降においては必要でないこと、いいかえるとCRPの作用は閉鎖複合体を形成するまでのステップに限定されると結論した。
2)CRPの転写活性化に関与する機能及び構造についての詳細を解析する目的で、CRPのC末ドメインの欠失を行なった。CRPのC末端ドメインはhelix-turn-helixのDNA結合モチーフやRNAポリメラーゼとの相互作用に関与する領域が存在するが、それらの領域まで欠失が及ばなくてもDNA結合活性が劇的に減少することが確認され、C末部分のDNA結合への関与が明かになった。
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