CTL認識腫瘍拒絶抗原ペプチドの同定と抗腫瘍効果の検討

• 研究課題/領域番号: 07274243
• 研究種目: 重点領域研究
• 配分区分: 補助金
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 中山 睿一 岡山大学, 医学部, 教授 (60180428)
• 研究分担者: 上中 明子 岡山大学, 医学部, 助手 (50273967) ; 安治 敏樹 岡山大学, 医学部, 講師 (10032905) ; 小野 俊朗 岡山大学, 医学部, 助手 (50185641)
• 研究期間 (年度): 1995 – 1997
• 研究課題ステータス: 完了 (1997年度)
• 配分額: 21,400千円 (直接経費: 21,400千円); 1997年度: 7,500千円 (直接経費: 7,500千円); 1996年度: 6,900千円 (直接経費: 6,900千円); 1995年度: 7,000千円 (直接経費: 7,000千円)
• キーワード: 細胞傷害性T細胞 / マウス白血病 / 拒絶抗原ペプチド / 多価ペプチド / 細胞傷害性T細胞(CTL) / 拒絶抗原 / 抗原プロセッシング / Akt / プロテアソーム / 熱ショック蛋白 / ペプチド

研究概要

1.pRL1aペプチドのL^d分子結合アミノ酸残基とエピトープ残基
BALB/cマウス白血病RL♂1の細胞傷害性T細胞(CTL)認識拒絶抗原pRL1aペプチドのH-2クラスIL^d分子への結合に関与するアミノ酸残基およびCTLにより認識されるエピトープアミノ酸残基を検討した。pRL1aペプチドの各アミノ酸をそれぞれAlaで置換しアラニン置換ペプチドを合成し、L^d分子への結合を競合阻止によって検討したところ、8番目(P8)のLeuが主に結合に関与し、2番目(P2)のProが一部結合に関与していることが明らかになった。さらに、アラニン置換ペプチドをP815に感作し、pRL1a特異的CTLによる認識を検討した結果、pRL1aペプチド特異的ではあっても、pRL1a内で認識するアミノ酸残基のセットが異なることが明らかになった。RT-PCRによるCTLのVβ遺伝子の解析でも、用いられるVβは異なっていた。このことから、エピトープペプチドを認識するCTLに多様性があることが明かになった。
2.pRL1aペプチドによる抗腫瘍効果
pRL1aペプチドによる抗腫瘍効果を検討するため、Lysコアに8価のpRL1aを結合させた多価pRL1aMAP(multiple antigen peptide)を合成してBALB/cマウスに投与し、CTLの生成と腫瘍増殖に及ぼす効果を検討した。その結果、pRL1aペプチドそれ自身では効果がないが、pRL1a MAPによる免疫でBALB/cマウス脾細胞にpRL1a特異的CTLを誘導した。さらに、in vivo感作の際に、CD4^+T細胞とAPCが必要であることを明らかにした。また、pRL1a MAPによるin vivo感作でRL♂1腫瘍の増殖を特異的に抑制できることを明らかにした。

研究成果

• [文献書誌] Tsuji,K.,et al: "Requirement of CD4 T cells for skin graft rejection against thymus leukemia (TL) antigen and multiple epitopes on the TL molecule recognized byCD4 T cells." J.Immunol.159. 159-166 (1997)
• [文献書誌] Kakeya,H.,et.: "A 77-kilodalton protein of cryptococcus neoformans,a member of the heat shock protein 70 family,is a major antigen detected in the sera of mice with pulmonary cryptococcosis." Infect.Immunity. 65. 1653-1658 (1997)
• [文献書誌] Yokoi,T.,et al.: "Diversity of epitopes recognized by cytotoxic T lymphocytes that are specific for rejection antigen peptide pRL1a presented on BALA/c leukemia RL♂1." Int.Immunol.9. 1195-1201 (1997)
• [文献書誌] Shimbara,N.,et al.: "Double-cleavage production of the CTL epitope by proteasomes and PA28 : role of the flanking region." Genes to Cells. (in press).
• [文献書誌] Wada,H.,et al.: "Rejection antigen peptides on BALB / c RL♂1 leukemia recognized by cytocoxic Tlymphosytes : derivation from the normally untranslated 5′-region of the c-akt proto-oncogen activated by LTR." Cancer Research. 55. 4780-4783 (1995)
• [文献書誌] Chen,B.-G.,et al.: "Inhibition by CsA and FK506 of the in vitro proliferative response of γδ T cells on stimulation with anti-TCR δ mAb." Transplant Immunol.4. 158-162 (1996)
• [文献書誌] Ono,T.,et al.: "Production of murine leukemia RL♂1 rejection antigen peptide pRL1a by proteolysis of naturaL precursor pRL1b." Jpn.J.Cancer Res.87. 1165-1170 (1996)
• [文献書誌] Kakeya,H.,et al.: "A 77 kDa protein from cryptococcus neoformans,a member of the heat shock protein 70 family,is a major antigen detected by sera of mice with pulmonary cryptococcosis." Infect.Immunity. (in press).
• [文献書誌] 中山睿一: "細胞傷害性T細胞の認識する腫瘍抗原ペプチド" Molecular Medicine臨時増刊号 《免疫1996-97》. 33. 92-100 (1996)
• [文献書誌] 中山睿一: "腫瘍抗原ペプチド" Mebio. 13. 44-49 (1996)
• [文献書誌] Okumura,C.,et al.: "Induction of murine γδ T cells cytotoxic for xenogeneic rat cells." J.Immunol.154. 1114-1123 (1995)
• [文献書誌] Wada,H.,et al.: "Requirement of CD4^+ T-cells and antigen presenting cells for primary in vitro generation of CD8^+ cytotoxic T-cells against L^d-binding self peptide p2Ca." Immunology.84. 633-637 (1995)
• [文献書誌] Harutsumi,M.,et al.: "Rejection of parental Meth A tumor on concomitant inoculation of Meth-A cells infected retrovirally with the interferon-γ gene into (BALB/c x C57BL/6) F_1 mice." Int.J.Oncol.7. 233-238 (1995)
• [文献書誌] Baba,H.,et al.: "Two isotypes of murine nm23/nucleoside diphosphate kinase,nm23-M11 and nm23-M2 are involved in metastatic suppression of a murine melanoma line." Cancer Research. 55. 1977-1981 (1995)
• [文献書誌] Wada,H.,et al.: "Rejection antigen peptides on BALB/c RL♂1 leukemia recognized by cytotoxic T lymphocytes : derivation from the normally untranslated 5′-region of the c-akt proto-oncogene activated by LTR." Cancer Research. 55. 4780-4783 (1995)