| 研究課題/領域番号 |
07456140
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
応用獣医学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
稲葉 睦 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (00183179)
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| 研究分担者 |
松木 直章 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助手 (40251417)
土井 邦雄 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (70155612)
小野 憲一郎 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (50111480)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
7,700千円 (直接経費: 7,700千円)
1996年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
1995年度: 6,300千円 (直接経費: 6,300千円)
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| キーワード | 赤血球膜 / 遺伝性疾患 / バンド3 / 陰イオン輸送 / 酸塩基平衡 / 陰タンパク質 / 膜骨格蛋白質 / ウシ / アニオントランスポート / 膜タンパク質 / 膜骨格タンパク質 / 遺伝子疾患 / アニオン・トランスポート / 血液酸塩基平衡 / O_2 / CO_2運搬 |
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| 研究概要 |
A.赤血球ならびに腎バンド3 cDNAの単離・同定
1)正常牛、ならびにバンド3欠損症牛の骨髄cDNAライブラリーより両者で同一サイズの赤血球バンド3 cDNA(3.4kb)をクローン化した。その解析から、牛赤血球バンド3は930アミノ酸残基から成ることが明らかになり、また、バンド3欠損症における遺伝子異常は、既に報告した664番目のコドンにおけるナンセンス変異(R664X)のみであり、それが原因遺伝子異常であることが確認された。
2)上記に基づき、ゲノムDNAからPCR-SSCP法、あるいはPCR-RFLP法による遺伝子診断法を確立した。
3)ウシ腎のライブラリーから、赤血球バンド3のtruncated fromである腎バンド3cDNAをクローン化した。現在、その5'側配列を解析中である。
B.バンド3遺伝子を導入した細胞を用いてのバンド3機能の検討
1)クローン化した正常、ならびに欠損症牛由来の赤血球、および腎バンド3 cDNAから、まず、in vitro転写・翻訳系で正常、ならびに変異バンド3蛋白質の合成・発現を検討した。その後、cDNAをpcDNA3.1ベクターに組み込み、COS-1細胞への導入し、安定的にバンド3蛋白質を発現する細胞を選択している。それが得られれば、細胞のイオン環境の恒常性維持機能、エネルギー代謝、増殖率、膜骨格構造等を比較・検討する予定である。
C.ヘテロ保因牛における病態解析
1)上記A-2による遺伝子診断で確定診断したヘテロ保因牛13頭、正常牛74頭の赤血球について、膜蛋白質、アニオン輸送、形態を解析した。その結果、ヘテロは無症候性であるにも関わらず、バンド3が正常の70%に、アニオン(^<35>SO_4^<2->)輸送が60%に、それぞれ減少していること、軽度-中等度の病態異常(球状 赤血球症)を生じていることが判明した。
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