| 研究課題/領域番号 |
07457357
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
麻酔・蘇生学
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
坂部 武史 山口大学, 医学部, 教授 (40035225)
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| 研究分担者 |
石川 敏三 山口大学, 医学部, 助手 (90034991)
松本 美志也 山口大学, 医学部・附属病院, 講師 (60243664)
佐野 隆信 山口大学, 医学部・附属病院, 助手 (40243670)
中木村 和彦 山口大学, 医学部, 助教授 (50180261)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
5,100千円 (直接経費: 5,100千円)
1996年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
1995年度: 3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
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| キーワード | 脳虚血 / 虚血性神経細胞死 / calpain / calpastatin / 細胞骨格タンパク質 / fodrin / calpain inhibitor-1 / 脳低温 / 細胞内情報伝達 / カルパイン / カルパスタチン / 細胞骨格蛋白 / フォドリン |
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| 研究概要 |
脳虚血の病態進行に、細胞内カルシウム濃度の増大が大きな鍵を握っている。カルシウム依存性のタンパク質分解酵素calpainの活性化およびcalpastatin(内因性修飾物質)の変動は、細胞骨格タンパク質fodrinの分解に関わり、虚血傷害を修飾する可能性がある。本研究では、ラットの脳虚血モデルを用い、calpain、calpastatinと細胞骨格タンパク質について検討し、虚血後脳障害の新しい治療法の展開をはかることを目的とした。
1.断頭モデル
断頭脳標本のhomogenateでWestern blotting法によりfodrinを測定,azocaseinとの反応からm-calpainを測定した。また、加熱処理試料でcalpastatinを測定した。37°Cでは断頭後40分の間に著明なα-fodrinの分解を認めた。m-calpainは有意な変化を示さなかった。Calpastatin活性は有意に減少した。断頭前〜後に33°Cに維持するとα-fodrinの分解が抑制された。
2.前脳虚血モデル
両側総頸動脈遮断、低血圧50mmHgモデルでは、30分虚血時および再灌流60分後に、α-fodrin分解が約1.5倍、2倍に増加した。Calpastatin活性は有意な変化を示さなかったが、細胞質中のcalpainは再潅流で有意に減少し、calpainが活性化(膜へ移行)された結果と考えられた。
Calpain inhibitor-1(CAI)静注(虚血10分前)で、再潅流60分のα-fodrinの分解が有意に抑制され、細胞質中のcalpainの減少(活性化)も抑制傾向を示した。
Zymographyでは、15分虚血(血圧35mmHg)再潅流60分で、特に海馬でfodrinの分解と、細胞質中のcalpainの減少(活性化)が著明であった。
以上より、虚血で細胞質中のcalpainが減少(活性化)し、α-fodrinの分解が亢進する。この変化は海馬で顕著で、低体温とCAIで抑制されることが明らかとなり、虚血性脳障害の新たな治療の展開につながる結果が得られた。
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