齲蝕におけるヒトDNAの分子疫学的研究

• 研究課題/領域番号: 07457503
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 矯正・小児・社会系歯学
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 坂本 征三郎 東北大学, 歯学部, 教授 (00235178)
• 研究分担者: 渡邉 聡子 (渡辺 聡子) 東北大学, 歯学部・附属病院, 助手 (60250792) ; 浅沼 慎 東北大学, 歯学部・附属病院, 助手 (80202589) ; 千葉 潤子 東北大学, 歯学部・附属病院, 助手 (50197620) ; 小澤 雄樹 東北大学, 歯学部・附属病院, 講師 (90125518) ; 田浦 勝彦 東北大学, 歯学部・附属病院, 講師 (90005083) ; 楠本 雅子 東北大学, 歯学部, 助手 (80186395)
• 研究期間 (年度): 1995 – 1997
• 研究課題ステータス: 完了 (1997年度)
• 配分額: 5,600千円 (直接経費: 5,600千円); 1997年度: 600千円 (直接経費: 600千円); 1996年度: 500千円 (直接経費: 500千円); 1995年度: 4,500千円 (直接経費: 4,500千円)
• キーワード: う蝕 / DNA / 遺伝子 / PCR / 頬粘膜 / HLA-DQAI / 疫学調査 / DNAタイピング / ヒトDNA / 分子疫学 / 毛 / 口腔内診査 / う蝕活動性試験 / InstaGene / カリオスタット / 齲蝕 / 毛髪 / HLA DQα / DNAプローブ

研究概要

平成9年度は,カリエスフリーの者66名とDMFTが10以上の者40名のボランティア(平均年齢20歳)から頬粘膜を採取し,DNAを抽出精製した後,HLA遺伝子のうちHLA-DQA1のタイピングを行った。
1.頬粘膜の採取とDNA精製
前年度で毛髪からフェノール・クロロホルムを用いないでDNAを抽出する方法を確立したが,抽出したDNAを用いてPCR反応を行うと,増幅阻害を受けた試料が多数発現した。毛髪中のメラニンによりPCR反応が阻害されるという報告が最近発表され始めたため,今年から急遽,試料を頬粘膜の剥離細胞にかえた。剥離細胞を採取する際,口腔内の細菌や食物残渣が混入する恐れがあるため,プロテイナーゼとセントリコンを用いてそれらの混入物をろ過し,ヒトのDNAのみを抽出精製する方法を採用した。この方法で,全ての試料からPCR反応に必要なDNA量が得られた。
2.HLA-DQA1のタイピングとう蝕との関係
得られたDNAのHLA-DQA1領域をPCR法で増幅し,HLA-DQA1の各対立遺伝子に特異的な塩基配列と相補的なシークエンスが固定されているプローベストリップスと反応させた。反応後発色させ,発色パターンからHLA-DQA1を6タイプに分類した。
カリエスフリー群とカリエス多発群,それぞれのHLA-DQA1各タイプの出現頻度についてX^2検定を行ったところ,両群間には統計学的有意差が認められなかった。