研究課題/領域番号 |
07556080
|
研究種目 |
基盤研究(A)
|
配分区分 | 補助金 |
応募区分 | 展開研究 |
研究分野 |
植物保護
|
研究機関 | 京都大学 |
研究代表者 |
古澤 嚴 (古澤 巌 / 古澤 巖) 京都大学, 農学研究科, 教授 (10026594)
|
研究分担者 |
中根 弘之 トヨタ自動車株, 研究部・バイオラボ, 研究員
小畑 充生 トヨタ自動車株, 研究部・バイオラボ, 研究員
久保 康之 京都府立大学, 農学部, 助教授 (80183797)
|
研究期間 (年度) |
1995 – 1997
|
研究課題ステータス |
完了 (1997年度)
|
配分額 *注記 |
4,900千円 (直接経費: 4,900千円)
1997年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1996年度: 3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
|
キーワード | メラニン / カルプロパミド / サイタロン / Colletotrichum lagenarium / Magna porthe grisea / トリヒドロキシナフタレン / 付着器 / Magnaporthe grisea / トリヒドロオキシナフタレン / メラニン合成酵素 / サイタロン脱水酵素遺伝子 / p-ジフェノールオキシダーゼ / 酵素精製 / 結晶解析 |
研究概要 |
ウリ類炭そ病菌の宿主侵入にはメラニン合成が必須である。主要メラニン合成酵素であるポリケタイド合成酵素(PKS1)、サイタロン脱水酵素(SCD1)および1,3,8-トリヒドロキシナフタレン還元酵素(THR1)を大腸菌内で発現、精製した。発現にはpMALシステム、pETシステムを併用し、大腸菌で発現した蛋白質をアフィニティークロマトグラフィー法によって精製した。また、ポリケタイド合成酵素についてはさらにAspergillus oryzaeを用いた発現系を構築し、PKS1産物の同定を行った。近年、イネいもち病菌に対する新規防除薬剤としてカルプロパミドが開発され、その作用機作にメラニン合成系への関与が示唆されている。そこで、形質転換大腸菌から精製したSCD1を用いたin vitro反応系を確立し、カルプロパミドの本酵素活性に対する阻害作用を検討した。その結果、本薬剤によるメラニン合成阻害は、直接的なSCD1の活性阻害によって引き起こされることが明らかになった。さらに、酵母のTwo-hybridシステムを用いて純化SCD1酵素の相互作用について検討した。その結果、SCD1蛋白質が相互作用し、多重体を形成していることが示唆された。さらにSCD1およびTHR1に対するポリクローナル抗体を調製し、免疫ブロット分析によるメラニン合成酵素の発現制御機構の分析により翻訳後の制御機構の存在を明らかにし、防除薬剤創製の基礎的実験結果を得た。
|