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抗癌剤結合蛋白質・センサープロモーターを用いた新医薬分子探索システムの開発

研究課題

研究課題/領域番号 07556093
研究種目

基盤研究(A)

配分区分補助金
応募区分試験
研究分野 応用微生物学・応用生物化学
研究機関広島大学

研究代表者

杉山 政則  広島大学, 医学部, 教授 (30106801)

研究分担者 熊谷 孝則  広島大学, 医学部, 助手 (70274058)
塩谷 光彦  岡崎国立共同研究機構, 分子科学研究所, 教授 (60187333)
研究期間 (年度) 1995 – 1996
研究課題ステータス 完了 (1996年度)
配分額 *注記
1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1996年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
キーワード抗癌剤 / ブレオマイシン / メラニン色素 / tacプロモーター / チロシナーゼ / インテリジェントベクター / 抗BLMAモノクローナル抗体 / ブレオマイシン結合蛋白質 / プロ-モーター
研究概要

ブレオマイシン(Bm)は切れ味の良い抗癌剤であるが、一方で、肺線維症を起こしやすいのも事実である。それを回避するためには副作用のできる限り少ないBm系抗癌剤の開発が臨まれる。研究代表者はBm系抗癌剤を感知するプロモーター2種類を本研究期間内に発見し、それを利用して、Bm系抗癌剤を容易にスクリーニングできるシステムを以下のように確立した。先ず、平成7年度は、ベクターpMAB50を構築した。これは、β-lactamase遺伝子プロモーターの下流にチロシナーゼ構造遺伝子を配置し、かつ、BLMAをコードする遺伝子blmAを共存させている。事実、pMAB50を保有する大腸菌をBm存在下で培養すると、その大腸菌はメラニン色素を産生し、黒いコロニーを形成する。このように、pMAB50を保有する大腸菌を検定菌として利用することにより、Bmに加えて、ペプレオマイシンのようなBm系抗癌剤の存在を視覚的に判別できることがわかった。平成8年度は、Streptomyces antibioticus由来のチロシナーゼ構造遺伝子をレポーターとした、大腸菌で利用可能なプロモーター検索用ベクターpMX180を開発した際、興味深い現象を発見した。すなわち、pMX180中にチロシナーゼ構造遺伝子の上流にtacプロモーターを挿入することにより得られたキメラプラスミド(pMX180tac)を大腸菌細胞内に導入すると、その形質転換体はBm存在下でメラニン色素を産生した。このことは、tacプロモーターもまたBmの存在を感知してメラニン色素産生に関わるチロシナーゼ遺伝子の発現を誘導することを示唆している。このように、pMAB50やpMX180tac保有する大腸菌を検定菌として用いれば、大腸菌はBmを感知して黒色のメラニン色素を産生するため、迅速でかつ視覚的にBm系抗癌剤を判別できることがわかった。したがってこれらベクターを利用すれば、新しいBm系抗生物質をスクリーニングする上で、大いに役立つものと期待される。

報告書

(3件)
  • 1996 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1995 実績報告書
  • 研究成果

    (29件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (29件)

  • [文献書誌] Morita,E.: "Expression of multiple forms of fetal liver kinase 2(flk・2/flk・3) ligand in cultured human keratinocytes." Arch.Dermatol.Res.(in press). (1997)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Mizuta,K.: "RIC1,a novel gene required for ribosome synthesis in Saccharomyces cerevisiae." Gene. (in press). (1997)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ikeda,K.: "Cloning and sequence analysis of high expressed melanin-synthesizing gene from Streptomyces castaneoglobisporus." Appl.Microbiol.Biotechnol.45. 80-85 (1996)

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    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sugiyama,M.: "IS 431 mec mediated integration of a bleomycin resistance gene into the chromosome of a methicillin resistant Staphylocoecus aureus strain isolated in Japan." Appl.Microbiol.Biotechnol.46. 61-66 (1996)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kato,Y.: "The photoreceptor pigment of the unicellular organism Blepharisma generates hydroxyl radicals." J.Photochem.Photobiol.B.:Biology. 34. 29-33 (1996)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ikeda,K.: "Effects of methionine and Cu^<21> on the expression period of tyrosinase activity in Streptomyces castaneoglobisporus." J.Biochem.120. 1141-1145 (1996)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kinoshita,E.: "Growth of human pancreatic cancer cells,induced by human pancreatic phospholipase A_2 is mediated via its specific receptor but not via its catalytic property." Inter.J.Oncology.9. 1219-1225 (1996)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 杉山政則: "微生物その光と陰〜抗生物質と病原菌〜" 共立出版, 200 (1996)

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    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Morita, E.: "Expression of multiple forms of fetal kiver linase-2 (flk-2/flk-3) ligand in cultured human keratinocytes." Arch. Dermatol. Res.(in press). (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Mizuta, K.: "RIC1, a novel gene required for ribosome synthesis in Saccharomyces cerevisae." Gene. (in press). (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ikeda.K.: "Cloning and sequence analysis of high expressed melanin-synthesizing gene from Streptomyces castaneoglobisporus." Appl. Microbiol. Biotechnol. 45. 80-85 (1996)

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    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sugiyama.M.: "IS431 mec-mediated integration of a bleomycin-resistance gene into the chromosome of a methicillin-resistant Staphylococcus aureus strain isolated in Japan." Appl. Microbiol. Biotechnol. 46. 61-66 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kato, Y.: "The photoreceptor pigment of the unicellular organism Blepharisma generates hydroxyl radicals." J.Photochem. Photobiol B. : Biology. 34. 29-33 (1996)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ikeda, K.: "Effects of methionine and Cu^<2+> on the expression period of tyrosinaseactivity in Streptomyces castaneoglobisporus." J.Biochem.120. 1141-1145 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kinoshita, E.: "Growth of human pancreatic cancer cells, induced by human pancretic phospholipase A_2, is medited via its specific receptor but not via its catalytic property." Inter. J.Oncology. 9. 1219-1225 (1996)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sugiyama, M.: Microbiology, its light and shadow -antibiotic and pathogenic bacteria-. KYORITSU SHUPPAN, 200 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Morita. E: "Expression of multiple forms of fetal liver kinase-2 (flk-2/flk-3) ligand in cultured human keratinocytes." Arch. Dermatol. Res.(in press). (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Mizuta, K.: "RICI. a novel gene required for ribosome synthesis in Saccahronyces cerevisiae." Gene. (in press). (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Ikeda, K.: "Cloning and sequence analysis of high expressed melanin-synthesizing gene from Streptomyces castaneoglobisporus." Appl. Microbiol. Biotechnol.45. 80-85 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Sugiyama, M.: "IS431 mec-mediated integration of a bleomyucin-resistance gene into the chromosome of a methicillin resistant Staphylococcus aureus strain isolated in Japan." Appl. Microbiol. Biotechnol.46. 61-66 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Kato, Y.: "The Photoreceptor pigment of the unicellular organism Blepharisma generates hydroxyl radicals." J. Photochem. Photobiol. b. : Biology. 34. 29-33 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Ikeda, K.: "Effects of methionine and Cu^<2+> on the expression period of tyrosinase activity in Streptomyces castaneoglobisporus." J. Biochem.120. 1141-1145 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Kinoshita, E.: "Growth of human pancreatic cancer cells, induced by human pancreatic phospholipase A_2, is mediated via it specific receptor but not via its catalytic property." Inter. J. Oncology.9. 1219-1225 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] 杉山政則: "微生物その光と影〜抗生物質と病原菌〜" 共立出版, 200 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Sugiyama, M. et al.: "Overproduction of the bleomycin-binding proteins from bleomycin-producing Streptomyces verticillus and a methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Escherichia coli and their immunological characterisation." FEBS Lett.362. 80-84 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Bhuiyan, M. Z. A. et al.: "Molecular cloning and expression in Escherichia coli of bleomycin resistance gene from a methicillin-resistant Staphylococcus aureus and its association with IS431mec." Appl. Microbiol. Biotechnol.43. 65-69 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Sugiyama, M. et al.: "Gene technology to overproduce the enzymes useful as diagnostic reagents." Jpn. J. Clin. Pathol.43. 761-771 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Yuasa, K. et al.: "Bleomycin-induced β-lactamase overexpression in Escherichia coli carrying a bleomycin resistance gene from Streptomyces verticillus." FEMS Microbiol. Lett.132. 61-66 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Nishimura, M. et al.: "Blasticidin S-producing Streptomyces morookaensis possesses an enzyme activity which hydrolyzes puromycin." FEMS Microbiol. Lett.132. 95-100 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書

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公開日: 1996-04-01   更新日: 2016-04-21  

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