| 研究課題/領域番号 |
07557010
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 試験 |
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| 研究分野 |
薬理学一般
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
佐藤 公道 京都大学, 薬学部, 教授 (80025709)
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| 研究分担者 |
南 雅文 京都大学, 薬学部, 助手 (20243040)
金子 周司 京都大学, 薬学部, 助教授 (60177516)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
13,600千円 (直接経費: 13,600千円)
1996年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1995年度: 12,300千円 (直接経費: 12,300千円)
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| キーワード | インジツハイブリダイゼーション / mRNA / 二重染色 / オピオイド受容体 / 痛覚情報伝達 / ジゴキシゲニン / 画像解析 |
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| 研究概要 |
Double in situ hybridization (double ISH)法の際の非放射性標識プローブによる検出感度向上を目的とし、ジゴキシゲニン以外の標識方法としてフルオロセイン標識法を検討したがジゴキシゲニン法と感度は同程度であった。そこでジゴキシゲニン標識したプローブを用い、フローティングによるハイブリダイゼーションを行ったところ感度が向上することが明らかとなった。Double in situ hybridization法の結果の観察法として明視野暗視野同時観察のための顕微鏡ステージおよび照明装置を試作し、それを用いて得られた明暗視野同時画像を定量的に解析するため、画像をコンピューターに取り込むことを検討した。確立した方法を用いて痛覚情報伝達・制御系における受容体や神経伝達物質といった神経情報伝達関連分子間の共存を検討する手始めとして、すでに、前年度の研究により、実験者による顕微鏡下での観察にもとづく定量的解析が完了している。オピオイド受容体とサブスタンスP前駆体の共発現について、明暗視野同時画像をコンピューターに取り込んだ後、既存ソフトウエアであるNIH imageによる解析を行った結果、本方法の有効性が確認された。さらに、ISH法の結果解析手法として、フィルムオートラジオグラムの定量的解析法も検討した。フィルムオートラジオグラフィーにより得られた結果を、コンピューターに取り込み、定量的に解析する方法を確立し、脊髄後角におけるオピオイド受容体μ、δおよびκタイプの発現を定量的に解析した。アジュバンド関節炎による脊髄後角オピオイド受容体発現の変化を検討したところ、アジュバント関節炎により脊髄後角IおよびII層でオピオイド受容体μおよびκタイプのmRNA発現が増加しているが、δ受容体mRNA発現には変化がないことが明らかとなった。
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