| 研究課題/領域番号 |
07557326
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 試験 |
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| 研究分野 |
解剖学一般(含組織学・発生学)
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
塩田 浩平 京都大学, 医学研究科, 教授 (80109529)
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| 研究分担者 |
塚原 正人 山口大学, 医学部, 助教授 (20136188)
石橋 誠 京都大学, 医学研究科, 助手 (30232341)
森 千里 京都大学, 医学研究科, 助教授 (90174375)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1996年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | 蛍光in situ分子雑種法(FISH) / DNAプローブ / 異数性染色体異常 / ヒト胚子・胎児 / 固定組織 / retrospective診断 / XOターナー胎児 / In situ hybrization / FISH / 性染色体特異的遺伝子 / 性別判定 / 性染色体異常 / ヒト胎児 / 分子診断 / FISH法 / 性分化異常 |
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| 研究概要 |
1) Fluorescent in situ hybridization (FISH)法による固定組織切片上での特異的DNA塩基配列の検出ヒトのXおよびY染色体に特異的なDNA配列に対するプローブDXZ1およびDYZ1(Oncor社製)を用い、ヒト胎児固定標本の切片でFISH法を施工した。その結果、パラホルムアルデヒド(PFA)固定後24時間以内に包埋した組織については良好なシグナルが得られ、男性胎児の組織では細胞核ごとにDXZ1とDYZ1に対するシグナルがそれぞれ1個ずつ、女性胎児の細胞ではDXZ1に対するシグナルのみが核に2個ずつ検出された。
2)ヒト胎児組織を用いてFISH法を行うための至適条件の検討
DXZ1およびDYZ1のプローブを用いてFISH法を行う場合の標本の処理方法を検討した。4%PFAまたは10%ホルマリンで固定した標本ではFISH法によるシグナルが検出されたが、ブアン固定した標本では検出されなかった。以上から、ヒト胎児組織を用いてFISH法を行うためには新鮮な組織を4%PFA、4℃で固定した後、24〜48時間で包埋し、4〜6μmの厚さの切片を作成して反応を行うのがよいと判断された。なお、この方法を用いた場合、パラフィン包埋後少なくとも5年間までの標本については良好なFISHのシグナルが得られることが明らかになった。
3)性染色体異数性異常の診断
本方法の臨床的有用性を調べるため、胎児組織の染色体検査で45, XO(ターナー症候群)と診断された3例の流産ヒト胎児の固定組織を用いて、上と同様のFISHを行なった。その結果、全例の体細胞で1個の核にDXZ1に対するシグナルが1個のみ検出され、DYZ1に対するシグナルは検出されなかった。これにより、各染色体に特異的なプローブを用いれば、固定組織から異数性染色体異常を診断できることが示された。
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