| 研究課題/領域番号 |
07557342
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 試験 |
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| 研究分野 |
循環器内科学
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
岡本 洋 北海道大学, 医学部・附属病院, 助手 (50260394)
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| 研究分担者 |
榊原 順 新潟大学, 医学部, 助手 (90242403)
小野 輝夫 新潟大学, 医学部, 教授 (00000927)
川口 秀明 北海道大学, 医学部, 教授 (70161297)
北畠 顕 北海道大学, 医学部, 教授 (00124769)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
4,100千円 (直接経費: 4,100千円)
1996年度: 4,100千円 (直接経費: 4,100千円)
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| キーワード | コレステロール / スクアレン・エポキシダーゼ / 遺伝子 / 動脈硬化症 / 阻害薬 / DNAクローニング / コレステロール代謝 / スクアレンエポキシダーゼ / 代謝阻害薬 |
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| 研究概要 |
本研究では、コレステロール生合成系酵素の構造及び機能を明らかにし、その阻害剤を通じ効率的に高コレステロール血症、動脈硬化を是正することを目的とした。効率的なコレステロール生合成系遮断のため、まず、ラットのスクアレンエポキシダーゼ(スクアレン・エポキシダーゼ)cDNAをテルビナフィンの存在下でクローニングした。単離したラットスクアレン・エポキシダーゼ遺伝子をプローブとしてマウス及びヒトスクアレン・エポキシダーゼの全長のcDNAを単離した。ヌクレオチド配列から推定したラットスクアレン・エポキシダーゼは573個のアミノ酸を含み分子量は63,950を示した。アミノ酸の一次配列から膜結合ドメインの候補としてN末端近傍の27-43位の疎水性領域を有し、この領域の後方にはFAD結合ドメインモチーフであるβ1-αA-β-2モチーフを含んでいた。酵母を含め哺乳類スクアレン・エポキシダーゼで最も良く保存されている一次構造領域はウンデカペプチドとしてC末端側にあり、次いで保存されている領域はFAD結合ドメイン直後に存在した。これらの配列はラットの他マウス、ヒトでも共通に存在した。マウス、ヒト、酵母のアミノ酸の一次構造のホモロジーはそれぞれ、93、83、及び30%であった。さらに、大腸菌での発現系を確立し、精製したリコンビナント酵素の活性からスクアレン・エポキシダーゼ活性を有することを確認し、また、ノーザンブロテイングからmRNAが2.8kbのサイズを有し、ゲノム中で単一のコピーとして存在することを確認した。一方、阻害剤のアナログからはウンデカペプチドのごく近傍にある結合部位を同定した。さらに、ヒトの遺伝子ライブラリーをスクリーニングし、ヒトスクアレン・エポキシダーゼ遺伝子の全長は17kbで11個のエクソンを含んでいた。10個のイントロンは87から3.2kbの範囲にあった。エクソンI,IIはそれぞれ推定膜結合ドメイン及びFAD結合モチーフを有し、すべての遺伝子で共通なウンデカペプチドはエクソンVIIIに存在していた。またスクアレン・エポキシダーゼ遺伝子座は染色体8番に局在し、かつマイクロサテライトマーカーD8S508とリンクしていることが明らかとなった。マーカーは染色体8のq24.13テロメアに局在した。また、プロモーター領域の解析の結果イニシエーションコドンの上流700-800bpにあり、古典的なSRE様シスエレメントとNF-Yがステロールによるスクアレン・エポキシダーゼ遺伝子転写調節に重要な役割を有することが推定された。
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