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新しい突然変異マウスの作出と胚バンクの設立

研究課題

研究課題/領域番号 07558115
研究種目

基盤研究(A)

配分区分補助金
応募区分展開研究
研究分野 実験動物学
研究機関熊本大学

研究代表者

山村 研一  熊本大学, 医学部, 教授 (90115197)

研究分担者 森安 眞津子  (株)パナファームラボラトリーズ, 安全性研究所, 研究員
浦野 徹  熊本大学, 医学部, 助教授 (90101899)
鈴木 操  熊本大学, 医学部, 助教授 (60253720)
相沢 慎一  熊本大学, 医学部, 教授 (60073011)
研究期間 (年度) 1995 – 1997
研究課題ステータス 完了 (1997年度)
配分額 *注記
19,500千円 (直接経費: 19,500千円)
1997年度: 6,000千円 (直接経費: 6,000千円)
1996年度: 6,500千円 (直接経費: 6,500千円)
1995年度: 7,000千円 (直接経費: 7,000千円)
キーワードES細胞 / 遺伝子トラップ / 組換え / 胚葉体 / Cre / loxP / 胚様体 / 標的変異マウス
研究概要

遺伝子トラップ法を用いて変異マウスを作製するとともに、変異した遺伝子を容易に単離するため、方法論の開発を行い、それを用いて実際に変異マウスを作製し、その方法の効率を検討した。まず、効率よく遺伝子をトラップするために、胚葉体形成によるトラップクローンのスクリーニング系を樹立した。胚葉体は、初期胚における遺伝子発現を比較的忠実に再現しており、よいスクリーニング系と思われた。ついで、トラップベクターの開発を行った。従来のベクターでは、マウス内在性遺伝子をトラップしたとしても、それを単離しにくいという欠点があったが、バクテリオファージP1のCre-loxP組換えシステムを利用することにより、ベクターが複数コピー組込まれても、容易にそれらを除去し、遺伝子単離が容易になることが判った。さらに、遺伝子トラップ法の欠点の一つは、トラップの結果完全破壊はできても小さな変異を導入できないことであったが、いったんDNAが挿入されれば削除できないような変異型loxPを利用することにより、それが可能と考えられた。これを確認するため、左の反復配列に変異を導入したlox77と、右の反復配列に変異を導入したlox66を組み合わせることにより、遺伝子を挿入できることが判った。そこで、この変異型lox71をトラップベクターに利用することとした。これにより、トラップ後に、任意の遺伝子を挿入でき、小さな変異のみならあらゆる遺伝子をその部位に挿入できると期待された。上記の方法を用いて、遺伝子トラップを行なったところ、約4割が既知の遺伝子へ、4割がESTのデータベースに出ているものと相同性を有すること、残り2割が全く未知であることがわかった。以上から、胚葉体形成というスクリーニング系を用い、loxPを応用したトラップベクターを用いることにより、より効率的に遺伝子破壊マウスを作製し、かつ破壊した遺伝子を容易に単離し、その発現パターンを解析できることがわかった。今後、多数の変異マウス作製を試みる予定である。

報告書

(4件)
  • 1997 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1996 実績報告書
  • 1995 実績報告書
  • 研究成果

    (40件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (40件)

  • [文献書誌] Nagata, Y.et al.: "A 6-kb upstream region of the human transthyretin gene can direct developmental,tissue-specific,and quantitatively normal expression in transgenic mouse." J.Biochem.117. 169-175 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kitamura, D.et al.: "Molecular cloning and characterization of mouse HS1." Biochem.Biophys.Res.Commun.208. 1137-1146 (1995)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hashido, K.et al.: "Copy-dependent and position-independent expression of rat aldolase A gene." J.Biochem. 118. 601-606 (1995)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hiramatsu, R.et al.: "The 3′enhancer region determines the B/T specificity and pro-B/pre-B specificity of immunoglobulin Vk-Jkjoining." Cell. 83. 1113-1123 (1995)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ohbo, K.et al.: "Modulation of hematopoiesis in mice with a truncated mutant of the interleukin-2 receptor γ chain." Blood. 87. 956-967 (1996)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Niwa, H. et al.: "Cell-cycle-dependent expression of the STK-1 gene encoding a novel murine putative protein Kinase." Gene. 169. 197-201 (1996)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Abe, K.et al.: "Endoderm-specific gene expression in embryonic stem cells differentiated to embryoid bodies." Exp.Cell Res.229. 27-34 (1996)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Abe, K.et al.: "Purification and isolation of mouse primordial germ cells by FACSgal method." Develop.Biol.180. 468-472 (1996)

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    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Araki, K.et al.: "Targeted integration of DNA using mutant lox sites in embryonic stem cells." Nucleic Acid Res.25. 868-872 (1997)

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    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kimura, S.et al.: "2.1 kb 5′-flanking region of the brain type dystrophin gene directs the expression of lacZ in the cerebral cortex,but not in the hippocampus." Neurol.Sci.147. 13-20 (1997)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Araki, K.et al.: "Efficinecy ot recombination by Cre transient expression in embryonic stem ceols:comparison of various promoters." J.Biochem.122. 977-982 (1997)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sekimoto, T.et al.: "Region specific expression of murine Hox genes implies the Hox code-mediated patterning of the digestive tract." Genes to Cells. (in press). (1998)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nagata, Y.et al.: "A 6-kb upstream region of the human transthyretin gene can direct developmental, tissue-specific, and quantitatively normal expression in transgenic mouse." J.Biochem.117. 169-175 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kitamura, D.et al.: "Molecular cloning and characterization of mouse HS1." Biochem.Biophys, Res.Commun.208. 1137-1146 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hashido, K.et al.: "Copy-dependent and position-independent expression of rat aldolase A gene. Hiramatsu, R.et al." J.Biochem.118. 601-606 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] "The 3' enhancer region determines the B/T specificity and pro-B/pre-B specificity of immunoglobulin Vk-Jk joining." Cell. 83. 1113-1123 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ohbo, K.et al.: "Modulation of hematopoiesis in mice with a truncated mutant of the interleukin-2 receptor gamma chain." Blood. 87. 956-967 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Niwa, H.et al.: "Cell-cycle-dependent expression of the STK-1 gene encoding a novel murine putative protein kinase." Gene. 169. 197-201 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Abe, K.et al.: "Endoderm-specific gene expression in embryonic stem cells differentiated to embryoid bodies." Exp.Cell Res.229. 27-34 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Abe, K.et al.: "Purification and isolation of mouse primordial germ cells by FACSgal method." Develop.Biol.180. 468-472 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Araki, K.et al.: "Targeted integration of DNA using mutant lox sites in embryonic stem cells." Nucleic Acid Res.25. 868-872 (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kimura, S.et al.: "2.1 kb 5'-flanking region of the brain type dystrophin gene directs the expression of lacZ in the cerebral cortex, but not in the hippocampus." J.Neurol.Sci.147. 13-20 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Araki, K.et al.: "Efficiency of recombination by Cre transient expression in embryonic stem cells : comparison of various promoters." J.Biochem.122. 977-982 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sekimoto, T.et al.: "Region specific expression of murine Hox genes implies the Hox code-mediated patterning of the digestive tract." Genes to Cells. (in press).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Araki, K. et al.: "Targeted integration of DNA using mutant lox sites in embryonic stem cells." Nucleic Acid Res.25. 868-872 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Kimura, S. et al.: "2.1 kb 5'-flanking region of the brain type dystrophin gene directs the expression of lacZ in the cerebral cortex, but not in the hippocampus." J. Neurol. Sci.147. 13-20 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Araki, K. et al.: "Efficinecy of recombination by Cre transient expression in embryonic stem cells : comparison of various promoters." J. Biochem.122. 977-982 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Sekimoto, T. et al.: "Region specific expression of murine Hox genes implies the Hox code-mediated patterning of the digestive tract." Genes to Cells.(in press). (1998)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Ohbo,K.et al.: "Modulation of hematopoiesis in mice with a truncated mutant of the interleukin-2 receptor γ chain." Blood. 87. 956-967 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Niwa,H.et al.: "Cell-cycle-dependent expression of the STK-1 gene encoding a novel murine putative protein kinase." Gene. 169. 197-201 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Abe,K.et al: "Endoderm-specific gene expression in embryonic stem cells differentiated to embryoid bodies." Exp.Cell Res.229. 27-34 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Abe,K.et al.: "Purification and isolation of mouse primordial germ cells by FACSgal method." Develop.Biol.180. 468-472 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Nagata,Y.et al.: "A 6-kb upstream region of the human transthyretin gene can direct developmental,tissue-specific,and quantitatively normal expression in transgenic mouse." J.Biochem.117. 169-175 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Kitamura,D.et al.: "Molecular cloning and characterization of mouse HS1." Biochem.Biophys.Res.Commun.208. 1137-1146 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Hashido,K.et al.: "Copy-dependent and position-independent expression of rat aldolase A gene." J.Biochem.118. 601-606 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Hiramatsu,R.et al.: "The 3′enhancer region determines the B/T specificity and pro-B/pre-B specificity of immunoglobulin Vк-Jк ioining." Cell. 83. 1113-1123 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Sakimura,K.et al.: "Reduced hippocampal LTP and spatial learning in mice lacking NMDA receptor ε1 subunit." Nature.373. 151-155 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] llic.D.et al.: "Focal adhesion kinase is not essential for in vitro and in vivo differentiation of ES cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.209. 300-309 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Tobe,K.et al.: "Identification of a 190-kDa protein as a novel substrate for the insulin recepter kinase functionallv similar to ilnsulin recepter substrate-1." J.Biol.Chem.270. 5698-5701 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Kashiwabuchi,N.et al.: "Impairment of motor coordination,Purkinje cell synapse formation and cerebellar long-term depression in GluRδ2 mutant mice." Cell.81. 245-252 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書

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公開日: 1995-04-01   更新日: 2016-04-21  

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