| 研究課題/領域番号 |
07660378
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
応用動物科学
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
南 直治郎 京都大学, 農学部, 助手 (30212236)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
1996年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1995年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
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| キーワード | マウス胚 / 発生 / 卵管 / E-カドヘリン / Gap Junction / プロテインキナーゼC / p34^<cdc2>キナーゼ / マウス初期発生 / ギャプ結合 / p34cdc2キナーゼ / mouse embryo / oviduct / E-cadherin / gap junction / protein kinase C |
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| 研究概要 |
卵管の影響下でマウス1細胞期胚を体外培養すると、胚は体外培養における発生停止を起こすことなく、正常にその後の発生を維持できる。これらの胚では4細胞期に割球の偏平化と細胞接着面の増大が観察されることが報告されているが(Minami et al., 1992)、本研究において、この4細胞期胚の細胞接着面にカドヘリン分子が局在することが間接蛍光抗体法によって明らかになった。一般に、カドヘリン分子の細胞接着面への局在は8細胞期におけるコンパクション開始に起こるとされているが、体外における卵管組織との共培養系においては局在が早期に起こることが観察された。このカドヘリンの局在にはプロテインキナーゼCが関与すると考えられているが、接着面の増大した4細胞期胚をPKC阻害剤で処理すると細胞接着が減少すること、またPKA阻害剤で処理すると割球の偏平化が阻害されることが明らかになったが、詳細な分子機構については不明である。また、同様の卵管環境下で発生した4細胞期においては、細胞間の情報伝達に関与するGap Junctionがすでに形成されていることも観察された。機能的なGap Junctionの形成はコンパクション時に始まることや、コネキシン43がGap Junctionへと形成される場合にもコネキシン43のリン酸化が関与していることが示唆されており、初期胚発生過程における卵管の影響とタンパク質のリン酸化についてもさらに詳細な検討が必要である。また、細胞分裂に大きく関与するp34^<CDC2>キナーゼの活性についても測定し、卵管の影響が初期胚の細胞周期の機能に与える影響についても検討した。卵管環境下で発生する胚においてはp34^<CDC2>キナーゼ活性は上昇し、正常な発生過程を示すのに対して、発生停止を示す胚ではp34^<cdc2>キナーゼ活生の上昇は認められなかった。発生停止を示す胚においてもDNA合成は完了しているため、発生停止がG2期に起こることが確認されたが、核膜の崩壊や染色体の凝縮は観察されなかった。また、この胚をokadaic acidで処理すると、核膜の崩壊と染色体の凝縮が観察されることから、G2期における発生停止には減数分裂におけるdictyate期での停止と共通のメカニズムが存在している可能性が示唆され、卵管環境が発生停止を解除するなんらかのシグナルを供給していることが明かとなった。
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