| 研究課題/領域番号 |
07670274
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
寄生虫学(含医用動物学)
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| 研究機関 | 信州大学 |
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研究代表者 |
菅根 一男 信州大学, 医学部, 教授 (50112488)
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| 研究分担者 |
加藤 久晴 信州大学, 医学部, 助手 (40281042)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1996年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
1995年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | Dirofilaria immitis / immunodominant antigen / promoter / Dirotilaria immitis / 犬糸状虫 / 抗原遺伝子 / 遺伝子発現 |
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| 研究概要 |
我々は、犬糸状虫症患者血清と反応するimmunodominant antigenをコードするcDNA (cD34)およびゲノムDNA (Dg2)をクローニングし、この遺伝子は幼虫特異的に発現するstage-specificityを示すことを以前報告した。Dg2の発現制御機構を解析するために必要な上流領域をクローニングするため、新たに作成したgenomic DNA libaryをcD34のexon1およびexon2の一部を含むDNA断片をプローブとしてスクリーニングを行ったところ、5つの陽性クローンが得られた。制限酵素地図を作成したところ、これらはすべて同一の遺伝子であることが判明した。これらのうち2つのクローンより8268bpの塩基配列(DgK)および転写開始点の解析を行ったところ、転写開始点より149bpを除くexon領域の配列はDg2と同じであるにも関わらず、exonの長さ、intronの位置と配列に大きな違いが認められた。ミクロフィラリア、雄および雌成虫より抽出したゲノムDNAを用いたSouthern blot解析およびDg2とDgKに共通なプライマー(長さの異なるintronを挟む)を用いたPCRの結果から、Dg2とDgKは同時には存在せず、ファミリーを構成していないと考えられた。次ぎに、DgKの発現制御機構を解析するため、^-1837から^+1329の領域をCaenorhabditis elegans用レポーターベクター、pPD21.28へ組み込んだプラスミドを作成した。これをC.elegansへ微注入し、11日後にlacZ染色を行ったところ、消化管において特異的に発現している個体が認められた。このことから、C.elegansの系は寄生線虫の遺伝子解析にも利用できるものと思われる。
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