エンドセリン受容体の遺伝子転写調節機構と細胞増殖・接着における意義に関する研究

• 研究課題/領域番号: 07671130
• 研究種目: 一般研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 内分泌・代謝学
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 吉政 孝明 京都大学, 医学研究科, 助手 (00252429)
• 研究分担者: 荒井 宏司 京都大学, 医学研究科, 助手 (00263088)
• 研究期間 (年度): 1995
• 研究課題ステータス: 完了 (1995年度)
• 配分額: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円); 1995年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
• キーワード: エンドセリン / エンドセリン受容体 / 転写 / シス配列 / RNAスプライシング

研究概要

1.エンドセリン(ET)受容体遺伝子の転写調節機構の解析:
ヒトET-A受容体遺伝子5′隣接領域のfunctional assayを用いた検討により、-0.2kb〜-857b間に負の転写調節領域の、-137b〜-53b間及び-53b〜+251b間に正の転写調節領域の存在を明らかにした。更に、-137b〜-53bの正の転写調節領域をA7r5核抽出物を用いたゲルシャフトアッセイより解析した結果、-106b〜-78b間に核蛋白の結合を認めた。フットプリントアッセイの結果、-91b〜-83b間にCCCCACCTTからなる核蛋白結合部位を認めた。このようにET-A受容体遺伝子のbasal transcriptional activityには新しいシス配列が関与していることが示唆された。
2.エンドセリン-A受容体遺伝子alternative RNA splicingの遺伝子発現調節機構における関与の検討:
ヒト肺total RNAをET-A受容体cDNAの全翻訳領域を増幅するプライマーを用いたRT-PCRを行うと、予想されるET-A受容体転写産物以外にbandsを認めた。これらに対するクローンをクローニングすると、それぞれエクソン4あるいはエクソン3,4がsplice outされたアイソホームであった。ET-A受容体遺伝子発現調節機構の一つを示唆するものと思われた。

研究成果

• [文献書誌] J. Yamashita et al.: "Cis elements for transcriptional regulation of the human endothelin-A receptor gene." J. Cardiovasc. Pharmacol.26(Suppl. 3). S26-S28 (1995)
• [文献書誌] Y. Miyamoto et al.: "Multiple transcripts of human endothelin-A receptor gene detected by reverse transcription and the polymerase chain reaction." J. Cardiovasc. Pharmacol.26(Suppl. 3). S29-S31 (1995)
• [文献書誌] Y. Miyamoto et al.: "Alternative RNA splicing of human endothelin-A receptor generates multiple transcripts." Biochemical J.(in press).
• [文献書誌] J. Hiraoka et al.: "Augmented expression of the endothelin-A receptor gene in cultured mesangial cells from stroke-prove spontaneously hypertensive rats." Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. Suppl 1. S191-S192 (1995)
• [文献書誌] O. Nakagawa et al.: "Gene expression of prostacyclin receptor in the hypertrophied heart of spontaneously hypertensive rats." Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. Suppl 1. S270-S272 (1995)
• [文献書誌] O. Nakagawa et al.: "Gene regulation of brain natriuretic peptide in cardiocyte hypertrophy by α_1-adrenergic stimulation" Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. Suppl 1. S183-S185 (1995)
• [文献書誌] I. Kishimoto et al.: "Endothelin-induced activation of mitogen-activated protein kinases in glomerular mesargial cells from normotensive and stroke-prone spontaneously hypertensive rats." Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. Suppl 1. S207-S208 (1995)
• [文献書誌] M. Nakagawa et al.: "Preparation of a monoclonal antibody against mouse brain natriuretic peptide(BNP) and tissue distribution of BNP in mice." Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. Suppl 1. S186-S187 (1995)
• [文献書誌] M. Goto et al.: "Altered gene expression of natriuretic peptide receptor subtypes in the K idnoy of stroke-prove spontaneously hypertensive rats." Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. Suppl 1. S177-S179 (1995)
• [文献書誌] Y. Ogawa et al.: "Molecular biology and biochemistry of natriuretic peptide family." Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 22. 49-53 (1995)
• [文献書誌] N. Hama et al.: "Rapid ventricular induction of brain natriuretic gene expression in experimental acute myocardial infarction." Circulation. 92. 1558-1564 (1995)
• [文献書誌] O. Nakagawa et al.: "Rapid transcription activation and early mRNA turnover of brain natriuretic peptide in cardiocyte hypertrophy-Evidence for brain natriuretic peptide as an “emergency cardiac normone against ventricular overload-." J. Clin. Invest.96. 1280-1287 (1995)
• [文献書誌] H. Itoh at al.: "Significance of autocrine/paracrine network in renal vascular and mesangial growth." Jpn. Heart J.36. 501- (1995)
• [文献書誌] Y. Ogawa et al.: "Structural organization and chromosomal assignment of the human prostacyclin receptor gene." Genomics. 27. 142-148 (1995)
• [文献書誌] T. Ikeda et al.: "Natriuretic peptide receptors in human arterial and venous coronary bypass vessels and rabbit vern grafts." Hypertension. (in press).
• [文献書誌] K. Doi et al.: "Vascular endothelial growth factor potently suppresses CNP secretion from endothelial cells." Hypertension. (in press).
• [文献書誌] N. Tamura et al.: "cDNA cloning and gene expression of human type I alpha cGMP-dependent protein kinase." Hypertension. (in press).
• [文献書誌] Y. Komatsu et al.: "Regulation of endothelial production of C-type natriuretic peptide in coculture with vascular smooth muscle cells-The role of vascular natriuretic peptide system in vascular growth inhibition." Cir. Res.(in press).
• [文献書誌] T. Igaki et al.: "C-type natriuretic peptide in chronic renal failure and its action in humans." Kidney Int.(in press).
• [文献書誌] T. Igaki et al.: "Insulin suppresses endothelial secretion of C-type natriuretic peptide, a novel endothelium-derived relaxing peptide." Diabetes. (in press).
• [文献書誌] Y. Komatsu et al.: "Regulation of secretion and clearance of C-type natriuretic peptide in the interaction of vascular endothelial cells and smooth muscle cells." J. Hypertens.(in press).