| 研究課題/領域番号 |
07671284
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
外科学一般
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
里見 進 東北大学, 医学部, 教授 (00154120)
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| 研究分担者 |
土井 秀之 (土井 秀幸) 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (90188839)
加藤 博孝 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (00240656)
佐竹 正博 東北大学, 医学部・附属病院, 講師 (70147370)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
1996年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
1995年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
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| キーワード | Galα / accommodation / α-glycosidatio / 抗gal-α-1-3gal / internalization / プラークフォーング法 / 自然抗体産生B細胞 / gal-α-1-3gal / ガラクトース複合体 |
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| 研究概要 |
肝臓、膵臓等の血流を伴う臓器のブタからヒトへの移植の際には、移植された臓器はヒト血中に存在する自然抗体と補体の働きによる超急性拒絶反応により直ちに拒絶される。この際にヒト自然抗体が結合する異種臓器の抗原はGalα(1,3)Gal末端とされている。それ故に、この抗原の臓器における存在の研究と、結合する抗体(抗GalαGal抗体)の研究は臓器移植で認められるaccommodaitonのメカニズムを知る上で必須となる。本研究ではまずブタサイログロブリンを用いたアフィニティクロママトグラフィカラムにてヒトの血清より抗Galα抗体を精製した。この抗体を用いてヒトのラ氏島を染色してもラ氏島は染色されなかった。しかしながら吸着前の血清や抗体を吸着した残りの成分では染色されることから、ブタラ氏島にはGalα(1,3)Gal以外の抗原が存在することが分かった。
一方、ヒト血清中の抗体を効果的に吸着することでaccommodationを誘導すべく、Galα(1,3)Gal抗原の合成を試みた。まずα-glycosidatioの手法を用いて合成を行い、1mMで81%、10mMで88%の有好な抑制効果を認めた。しかしながら化学合成による方法では最終的な収率は3,8%と低く、成人血清中の全自然抗体を中和するには約50gの量が必要で約1000万円の経費を要することが分かった。そこで合成をより簡便に行うために酵素反応を用いた抗原糖鎖の合成を行った。αガラクトシダーゼを使用することで反応基質のコストダウンと合成ステップの削減で大幅は時間の短縮が可能となり、経費も1/2に減額が出来た。この方法で得られた抗原(pNP-Gal)を用いた吸着でも1mMで77%、10mMで83%の良好な抑制効果が得られた。今後はこの抗原を用いたIn vivoでのAccommodationの実験を継続する予定である。
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