従来の病理学的手法で検索不能であった微小リンパ節転移に関する食道癌での検討

• 研究課題/領域番号: 07671355
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 消化器外科学
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 標葉 隆三郎 (1996) 東北大学, 医学部, 講師 (20192106); 片山 正文 (1995) 東北大学, 医学部・付属病院, 助手 (00177411)
• 研究分担者: 宮崎 修吉 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (50282075) ; 赤石 隆 東北大学, 医学部・附属病院, 講師 (60191847) ; 西平 哲郎 東北大学, 医学部, 助教授 (50101142) ; 標葉 隆三郎 東北大学, 医学部, 講師 (20192106) ; 高野 亮 東北大学, 医学部・付属病院, 助手 (30271935)
• 研究期間 (年度): 1995 – 1996
• 研究課題ステータス: 完了 (1996年度)
• 配分額: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円); 1996年度: 500千円 (直接経費: 500千円); 1995年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
• キーワード: p53 / p16 / MASA法 / PCR-SSCP法 / 食道癌 / 微小リンパ節転移 / RCR-SSCP

研究概要

食道癌手術55例について,主病巣およびリンパ節からのDNAの抽出を行った.リンパ節に関してはこのうち21例でDNA抽出ができた.まず主病巣に関して,p53の遺伝子異常を検討した.p53のエクソン5,6,7,8に関してPCR-SSCP法で検討し,25例で異常が認められた.これらの症例で,PCR産物のdirect sequencingを試みたが,この手法では塩基配列の決定ができなかった.そのためPCR産物をゲルから切り出し,ベクターに組み込んでサブクローニングを行い,塩基配列を決定した.15症例でp53の塩基配列の異常を確認した.そのうち1例で食道の多発癌症例があり,同一症例の2病巣でp53の異なる変異を検出できた.その症例のリンパ節転移巣のp53の変異のタイプから,一方の主病巣からの転移であることが判明し,興味深い知見が得られた.p16遺伝子については27例で検索し,そのうち14例で突然変異を確認した.8例がフレイムシフトであり6例がミスセンス変異であった.MASA法による検討では,p53およびp16の突然変異の部分の塩基配列を3'の末端に置きプライマーを作製し,PCRを行った.PCR条件により非特異的バンドが出現し判定が困難であった.