| 研究課題/領域番号 |
07671548
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
脳神経外科学
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| 研究機関 | 日本医科大学 |
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研究代表者 |
吉田 大蔵 日本医科大学, 医学部, 講師 (30210701)
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| 研究分担者 |
寺本 明 日本医科大学, 医学部, 教授 (60231445)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1997
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| 研究課題ステータス |
完了 (1997年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1997年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1996年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1995年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
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| キーワード | E stramustine / グリオーマ / 細胞侵潤 / コラゲナーゼ / Estramustine / 細胞浸潤 / Cell invasion / matrix metallo proteinase / microtubule / Matrigel / glioma / MTT assay / zymogram / グリオーマ glioma / collagenase / metalloproreiase |
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| 研究概要 |
Estramustine phosphateの10^3μMのstock solutionを作製し、ひとglioma細胞U87MGを用いて次の実験を行った。
(1)MTT assay;drug cytotoxityを検定し、投与濃度 及び投与時間依存性に細胞増殖を抑制した。(ID50=4.6μM)
(2)collagenolysis assay;matrix metalloproteaseのsubstrateである^<12>C labelled collagen typeIV溶液をペトリ皿に入れ、一晩乾燥する。ここにEstramustine溶液(0〜10μM)に入れた細胞を10^7個(5ml)のせて、30分〜48時間後に溶け出した^<12>Cをscintillation counterで測定し、細胞のtype IV collagenase活性の変化を分析した。投与濃度 及び投与時間依存性に活性は低下していた。
(3)zymogram;Estramustine溶液(0〜10μM)に負荷した細胞の培養液をextracellular matrixとして培養24時間後取り出し、あらかじめcollagen type IVを含ませたSDS-PAGE gelで電気泳動を行い、一晩collagenase賦活液でproenzymeを活性化して、collagenの融解によりtype IV collagenaseの活性を検定した。
(4)haptoinvasion assay;Boiden chamberを用いて、Estramustine溶液(0〜10μM)に入れた細胞を10^3個いれて、matrigelを塗布したmembraneの裏面へinvadeした細胞の数を観察することによって、腫瘍細胞の侵潤能にたいするEstramustineの抑制効果を確かめた。
今後はmicrorubuleがcell cycleに極めて重要な役割を担っていることから、抗microrubule剤であるEstramustineがglioma細胞にprogrammed cell death(apoptosis)をおこす可能性について研究をすすめていく方針である。
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