| 研究概要 |
雄性SDラット(10週齢)を用い、昨年度の神経病性疼痛(Ligation)ラット(疼痛過敏群)とは別に、末梢神経障害モデル-Avulsion(引き抜き群、n=18)とCrush(挫滅群、n=18)を作成した。各々、ペントバルビタール麻酔(35mg/kg,ip.)下に背臥位に固定し第5・6腰髄神経を露出、引き抜きと鉗子で15秒^*2回の圧迫を加えた。
手術後4日・1週間・3週間に各々、実験群・対照群と手術を施行していないラット(正常群、n=6)について左右後肢の疼痛過敏の有無をvon Freyフィラメントを用いて調べた。その後、ペントバルビタール麻酔下に4%パラフォルムアルデヒドを用いて潅流・固定して得られた各々のラットの脊髄からマイクロトームを用いて第1腰髄・第5腰髄・第6腰髄のレベルの厚さ40μmの脊髄組織切片標本を作成した。得られた切片をABC法(Vector社)とNADPH Diaphorase法を用いて各々NOSの免疫組織染色と酵素反応による組織染色を行なった。
染色後、顕微鏡下に脊髄の各レベルごとに両側後角部(Laminae I,II,III)、中心管周囲(Lamina X)、両側側索部(Lamina VII)に分けて観察・写真撮影し、染色された陽性細胞(NOSを含む神経細胞)の数をカウントして、昨年度行った疼痛過敏群の結果を含めて各群間でレベルごと、また各群内で手術後期間ごとに各々正常群を対照としてANOVAを用いて比較検討した。
その結果、引き抜き群と挫滅群では手術後4日・1週間・3週間のすべてで左側後枝に正常群に比較して疼痛鈍麻を認めたが、対照群では認めなかった。また、引き抜き群と挫滅群では手術後1週間・3週間のすべてで第1腰髄・第5腰髄の左側後角部に対照群・正常群・疼痛過敏群の左側同部位と比べてNOS陽性の神経細胞の有意な低下を認めた(p<0.05)。総合的にまとめると、第1腰髄・第5腰髄の脊髄後角部NOS陽性神経細胞数は疼痛過敏・鈍麻と強い正の相関関係があると推測される。
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