| 研究課題/領域番号 |
07672026
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
機能系基礎歯科学
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| 研究機関 | 明海大学 |
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研究代表者 |
加藤 節子 明海大学, 歯学部, 教授 (50049376)
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| 研究分担者 |
藤本 健吾 明海大学, 歯学部, 助手 (90286013)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1996年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1995年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
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| キーワード | 破骨細胞 / 一酸化窒素(NO) / テトラヒドロビオプテリン / cGMP / 細胞内情報伝達 |
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| 研究概要 |
近年破骨細胞の骨吸収機能が酸化窒素(NO)により抑制されることが報告されているが、そのシグナル伝達系の機構の詳細は不明である。NOの細胞機能のひとつは、NOがグアニル酸シクラーゼを活性化してcGMPの生成を促し、cGMPにより作動されるイオンチャンネルを調節すること考えられる。本研究では、酸化窒素合成酵素(NOS)活性が一種のモノオキシゲナーゼとして補酵素テトラヒドロビオプテリン(BH4)により制御されているという報告があることから、破骨細胞のBH4合成系を明らかにし、細胞内のBH4生産を介したNOSおよびグアニル酸シクラーゼの活性化と骨吸収機能の調節の関係を検討することを目的とした。まずBH4生合成系の最終段階に働くセピアプテリン還元酵素(SPR)のヒト及びラットcDNAをRT-PCR法で増幅して大腸菌で発現させ、SPR活性を持ったタンパク質として収得できた。また得られた各発現タンパク質についてウサギを用いて抗体を作成した。これらはNorthern及びWestern blott法による破骨細胞内BH4合成系の検出のために有効である。さらに、破骨細胞のみを分離収得することは極めて困難であるが、今回既報を参考にしてウサギ大腿骨骨髄細胞から破骨細胞を分離した。得られた破骨細胞の抽出液につき、BH4はI_2酸化によりビオプテリンとしてからHPLC-蛍光検出法等によって測定し、又NO量はDamiani and Burini′s Methodで測定した結果、いずれも10^5cells中に有意義量を含有することが確認された。以上のことから破骨細胞は明らかにBH4生成能を持つことが示され、破骨細胞/骨芽細胞の骨細胞系について、細胞内BH4生成を介したNO、cGMP量と骨吸収との相関を検討する基盤を確立した。
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