| 研究概要 |
中枢モノアミン性神経は,意欲・快感・創造性の亢進など精神活動の根幹を支配する.分泌小胞膜モノアミン輸送活性はその細胞外液中濃度/神経活動度に決定的な影響を与える.筆者らは,PC12細胞(神経のモデル細胞)で,サイクリックAMP(cAMP)が分泌小胞膜モノアミン輸送を抑制的に調節することを発見した.本研究では,cAMPの作用機構,cAMPを介した内在性因子の作用,中枢神経内でのcAMPの作用,cAMP/プロテインキナーゼA(PKA)系と密接な関係をもつプロテインキナーゼC(PKC)系の作用を検討し,以下のことを明らかにした.
1.cAMPは分泌小胞膜アミントランスポタ-(VMAT)活性を抑制することにより,細胞外液中ドーパミン(DA)濃度を上昇させることを明らかにした(J.Neurochem.64,600-607.1995).また,PC12細胞で,VMAT活性を特異的な測定方法を最初に確立し,これによりVIP,やAMPなど内在性因子の分泌小胞膜アミン輸送調節作用を明らかにした(J.Biochem.118,291-296.1995).
2.cAMPによるVMAT活性抑制には,蛋白質リン酸化が関与することを明らかにした(Pteridines6,126-128,1995;FEBS Lett368,411-414.1995).
3.PKCの活性化も蛋白質リン酸化の過程を介してVMAT活性を抑制的に調節することを明らかにした(J.Biochem.投稿中).
4.ラット脳線条体のマイクロダイアリシス実験により,中枢モノアミン神経でもcAMPはVMAT活性を抑制し,シナプス間隙ドーパミン(DA)濃度を上昇させる(投稿準備中).
5.抗VMATペプチド抗体を用いて,VMATがPKAやPKCの標的蛋白質であるかどうかを検討したが,否定的な結果を得た.さらなる検討のため,VMATのリン酸化可能部位アミノ酸を除去置換した変異VMATcDNA作製を計画している.
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