| 研究課題/領域番号 |
07672079
|
|---|
| 研究種目 |
一般研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
保存治療系歯学
|
|---|
| 研究機関 | 徳島大学 |
|---|
研究代表者 |
阿座上 弘行 徳島大学, 歯学部, 助手 (40263850)
|
|---|
| 研究分担者 |
恵比須 繁之 大阪大学, 歯学部, 教授 (50116000)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1995
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
|
| 配分額 *注記 |
2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
1995年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
|
|---|
| キーワード | 歯周病 / 付着因子 / 遺伝子クローニング |
|---|
| 研究概要 |
歯周病原性細菌Eikenella corrodensの菌体表層に存在するレクチン様の高分子量複合体(LS)について遺伝子工学的解析を行った。
精製LS(500kDa以上)を還元下加熱処理することにより、SDS-PAGE上で約300kDaと45kDaの2本のバンドが検出された。そこで、この45kDa蛋白のN末端アミノ酸配列を決定し、これを基にPCRを行った。得られたDNA断片(69bp)から、サザンハイブリ法やPCR法による染色体walkingを行い、45kDa蛋白をコードする遺伝子領域(約2kb)を得た。DNA塩基配列およびそれから予想されるアミノ酸配列より、45kDa蛋白質はNeisseria属のポーリンと高い相同性が認められ、またグラム陽性細菌の外膜蛋白に特有の構造も認められた。
一方、E.corrodens遺伝子ライブラリー(7-20kbの挿入断片を含む)を作製し、LSのもつ付着・凝集活性を阻害する抗LSモノクローナル抗体を用いてイムノスクリーニングを行った。その結果、約1,200株から3つの陽性クローンが得られ、これらのクローンからはいずれも抗LS抗体に特異的に結合する25kDaの蛋白質の発現が認められた。これらのクローンからプラスミド(15-18kb)を分離し、マッピング解析や欠失解析などにより25kDa蛋白の発現に必要な領域1.2kbを特定した。
現在、クローニングされた遺伝子の解析と遺伝子産物の解析により、これらの蛋白質の構造及び機能を研究すると同時に、他の構成蛋白のクローニングを試みている。
|
