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口腔癌および大腸癌における各種プロテイン・ホスファターゼの解析

研究課題

研究課題/領域番号 07672159
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 外科系歯学
研究機関東京医科歯科大学

研究代表者

藤井 英治  東京医科歯科大学, 歯学部, 助手 (20221541)

研究分担者 中釜 斉  国立がんセンター研究所, 発がん研究部, 室長
研究期間 (年度) 1995 – 1996
研究課題ステータス 完了 (1996年度)
配分額 *注記
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1996年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1995年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
キーワードpRb / TGF-β / プロテイン・ホスファターゼ(PP) / G1期停止 / 特異的抗体 / ウェスタンブロット / プロテイン・ホスファターゼ / 発がん物質(PhIP) / TPR / GST / MBP / 融合蛋白質
研究概要

細胞周期のG1期からS期への移行には、retinoblastoma蛋白(pRb)のリン酸化が必須である。一方、ヒト正常上皮由来細胞株であるHaCaTは、transforming growth factor(TGF)-βで処理した場合、pRbは脱リン酸化状態にあり、G1期にて増殖停止する。また、脱リン酸化酵素であるプロテインホスファターゼ(PP)についてもPP2A,PP1の活性化がG2/M期,G1/S期の移行に必須であることが知られている。
本研究においては、G1期でのpRbの脱リン酸化がPPにより制御されているかについて、HaCaTにおけるPPの細胞内局在の解析、および口腔癌細胞での局在様式の変化の検索を行った。
ヒト口腔癌由来細胞株には、HSC4,HSC3,HOC313を用いた。HSC4はTGF-β処理時に、HaCaT同様G1期停止を引き起こし、pRbの脱リン酸化が生じるが、HSC3およびHOC313ではG1期にて停止せず、pRbはリン酸化されている。
2ng/mlのTGF-β処理した24時間後に、各細胞の蛋白を抽出して核と細胞質に分画し、PPの各種アイソタイプに対する特異的抗体を用いてウェスタンブロットを行った。その結果HSC3,HOC313,HSC4およびHaCaTにおける、PP1γ1蛋白の核内発現レベルは1:1:1:4であった。TGF-β処理時にはHSC3,HOC313では1:1のままであったが、HSC4,HaCaTでは0:1に低下していた。
一方PP1α蛋白では、1:1:0:2であった。TGF-β処理時にはHSC3,HOC313,HSC4では1:1:0のままであったが、HaCaTでは1に低下していた。
以上の結果より、pRbのリン酸化状態の変化とPP1γ1蛋白およびのPP1γ1核内レベルは、逆相関になっていることが明らかになった。

報告書

(3件)
  • 1996 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1995 実績報告書

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公開日: 1995-04-01   更新日: 2016-04-21  

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