| 研究課題/領域番号 |
07680736
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
分子生物学
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| 研究機関 | 近畿大学 (1996-1997)
三重大学 (1995) |
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研究代表者 |
村松 治雄 (松村 治雄) 近畿大学, 医学部, 助手 (10229536)
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| 研究分担者 |
河野 光雄 三重大学, 医学部, 助手 (00234097)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1997
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| 研究課題ステータス |
完了 (1997年度)
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| 配分額 *注記 |
1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1997年度: 300千円 (直接経費: 300千円)
1996年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
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| キーワード | RNA editing / polymerase / transcription / replication / phosphoprotein / baculovirus / nucleocapsid / RNAウイルス / 転写 / バキュロウイルス / 分子生物学 / パラミクソウイルス / ポリメラーゼ |
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| 研究概要 |
1.RNAeditingの解析に関しては、HPIV2のPおよびV遺伝子、さらにediting siteのG塩基の連続した部分(Gクラスター)を長くしたV遺伝子を発現するrecombinant baculovirus(rBV)を作製し、その感染昆虫細胞における蛋白合成およびmRNA合成を解析した。その結果、(1)V蛋白を発現するように構築したrBV感染昆虫細胞ではV蛋白のみならずp蛋白も検出された。(2)Vgene cDNAからin vitro転写により合成したVmRNAをウサギreticulocyte lysateにより翻訳させるとV蛋白のみか合成されるが、V蛋白を発現するように構築したrBV感染昆虫細胞からのmRNAを用いて同様に翻訳させるとV蛋白のみならずP蛋白も検出された。(3)V蛋白を発現するように構築したrBV感染昆虫細胞からのmRNAにはP蛋白をcodeするedited mRNAが検出された。すなわち、V遺伝子のediting siteのG塩基にG塩基の付加または欠失が検出された。これらの結果は、V蛋白を発現するように構築したrBV感染昆虫細胞においてはRNAediting様の現象(すなわちG塩基の挿入または欠失)が見られることを示している。また、editing siteのGクラスターのGの数を多くした方がこのRNA editing様現象の程度が高かったので、Gクラスターの長さがRNA editingに重要であることが示唆された。また、これらの結果はパラミクソウイルスのRNA editingに類似した現象が、パラミクソウイルスのRNAポリメラーゼの非存在下でも起こることを初めて明らかにしたものである。
2.転写複製系の再構成に関しては、NPおよびL遺伝子全長を動物細胞発現ベクターに構築し、動物細胞にて発現を確認した。さらに、NP遺伝子発現細胞においてNP蛋白はrecombinant P蛋白及びrecombinant V蛋白との結合に関しては機能的に発現していることを確認した。しかし、NPおよびL遺伝子を組み込んだトランスファーベクターを作成したが、rBVの作成には現在のところ成功していない。
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