| 研究概要 |
本研究は平成7年度及び8年度の2年間の研究計画によって構成されている。平成7年度はエラスチンの特異的で重要な機能である分子集合を有するペンタペプチド繰り返し配列Val-Pro-Gly-Val-Gly、リン酸化酵素によってリン酸化を受けるペプチド配列Arg-Gly-Tyr-Ser-Leu-Gly、及び経時的にAsnがAspに変換するペプチド配列Gly-Ser-Asn-His-GlyあるいはGly-Arg-Asn-Thr-Glyを作製した。Arg-Gly-Tyr-Ser-Leu-Glyはリン酸化酵素によってSer残基がリン酸化されるという期待どおりの結果が得られた。Gly-Ser-Asn-His-Gly及びGly-Arg-Asn-Thr-GlyのT_<2/1>(Asnの50%がAspに変換する時間)を調べるとそれぞれ6day及び28dayであった。平成8年度は平成7年度で合成したVal-Pro-Gly-Val-Glyに、Arg-Gly-Tyr-Ser-Leu-Glyを15:1の割合でブレンドしたpoly[15(Val-Pro-Gly-Val-Gly),(Arg-Gly-Tyr-Ser-Leu-Gly)]を合成した。分子量は5万以上であった。このポリマーの5mg/mlに1mM ATP存在下、3',5'-サイクリックAMP依存性プロテインキナーゼを加えて、24時間、30℃にて加温し、リン酸化反応を行い、poly[15(Val-Pro-Gly-Val-Gly),(Arg-Gly-Tyr-Ser(PO_4^<2->)-Leu-Gly)]を作製した。このリン酸化ポリマーの分子集合について検討したところ、Tm(分子集合によって濁度が50%に到達したときの温度)がリン酸化する前のポリマーに比べて高温側に14℃シフトする性質を示した。ついでリン酸化ポリマーのpoly[15(Val-Pro-Gly-Val-Gly),(Arg-Gly-Tyr-Ser(PO_4^<2->)-Leu-Gly)]の5mg/mlにアルカリホスファターゼを加えて、30℃、4時間インキュベートして脱リン酸化反応を行い、poly[15(Val-Pro-Gly-Val-Gly),(Arg-Gly-Tyr-Ser-Leu-Gly)]を作製した。この脱リン酸化ポリマーの分子集合について検討したところ、Tmはリン酸化ポリマーに比べて低温側に13℃シフトする性質を示し、最初のリン酸化前のポリマーとほぼ同じTmを有した。
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