| 研究課題/領域番号 |
07770143
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| 研究種目 |
奨励研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
人体病理学
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| 研究機関 | 岐阜大学 |
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研究代表者 |
森下 由紀雄 岐阜大学, 医学部附属病院, 助手 (20271562)
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| 研究期間 (年度) |
1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1995年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | Differential display / Northern blothybridization / 遺伝子発現 / 遺伝子 / mRNA / cDNA / 肝 / 多段階発がん |
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| 研究概要 |
同一患者から樹立したヒト高分化肝細胞がんおよび慢性肝炎のT抗原導入培養細胞株(がん:tPH5T、肝炎:tPH5CH)からtotalRNAを抽出し、differential display法を行った。80組のprimerの組み合わせのうち、55組において、sequence gel上に平均約50のbandが出現し、全体で約2800のbandが検索対象となった。それらのうち、濃度差のあった19個のbandに相当するPCR産物をprobeとして、両者の細胞株由来のRNAを用い、northern blothybridizationを行った。その結果、19個中4個のcDNA(DD1〜4)において同様の発現量の差を認めた。これらのうち、がん細胞に強い発現を有するDD4について検索を進めた。
DD4はtPH5T、tPH5CHのほか、肝細胞がんの培養株であるHepG2、Alexander、Li21のいずれにも、northern blot hybridizationにて発現を認めた。組織では、肝細胞がん2例、大腸がん1例に発現がみられた。DD4のsequencingを行い、homology検索を行ったところ、以下の2個のヒトcDNAと高い相同性を示した。
1.seq3034Homo sapiens cDNA clone Hy18-Ch13-Charon40-cDNA-843′
2.NIB794Homo sapiens cDNA 3′end similar to Alpha-tubulin
現在、ヒト胎児肝cDNA libraryを用いて、DD4のscreeningを行い、得られたcloneについてsequencingを行っている。また、in situ hybridization法を用いて、早期肝細胞がんや腺腫様過形成におけるDD4の発現についても検討中である。
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