| 研究課題/領域番号 |
07770597
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| 研究種目 |
奨励研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
小児科学
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| 研究機関 | 奈良県立医科大学 |
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研究代表者 |
田中 一郎 奈良県立医科大学, 医学部, 助手 (00201616)
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| 研究期間 (年度) |
1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1995年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | 血友病A / 第VIII因子 / ELISA / vWF / SSCP / PCR |
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| 研究概要 |
1.multi-ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)による異常第VIII因子の検出
われわれは5種類の認識部位の明らかな抗第VIII因子モノクローナル抗体を組み合わせたサンドイッチELISA法を確立し、34名の血友病A^+もしくはA^R患者においてそれぞれの抗原量を測定した。34名中1名の軽症患者(第VIII因子活性12%)でL鎖C_2領域を認識するNMC-VIII/5を含む組合せにおいてのみ明らかに低い抗原量(他は8%あるのに対し、1%未満であった)を示した。このことから、この患者の第VIII因子はL鎖C_2領域に何らかの異常を有するものと推測された。
2.異常第VIII因子のvWFに対する結合能の検討
正常vWFに対する本患者の第VIII因子の結合能は正常第VIII因子のそれに比し明らかな差は認めなかった。これは本患者の第VIII因子の異常部位がvWF結合部位(アミノ酸2308-2312の領域に存在すると推定されている)の近傍にはないことを示唆している。
3.異常第VIII因子の遺伝子異常の検討
これらの蛋白生化学的特性の結果をもとに、異常のあると思われるL鎖C_2領域にターゲットを絞り、PCRによるDNA増幅、SSCP(single strand conformation polymorphism)解析、塩基配列シークエンシングを行った。その結果、本患者の第VIII因子遺伝子は2159番目のarginineがcysteineに置換しているmissense mutationであることが判明した。
このように、本研究は異常第VIII因子を生化学的・分子生物学的に解析する上で、非常に意義のあるものであると思われる。
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