| 研究概要 |
抗腫瘍剤による白血病細胞のアポトーシス誘導機構に関して、特にアポトーシスに密接に関与すると考えられるエンドヌクレアーゼおよびプロテアーゼ同定することを目的として、検討を実施し、以下の結果が得られた。
【結果】
1)抗腫瘍剤VP-16処理によるMg^<2+>依存性endonucleaseの活性化:
HL-60細胞を20uM VP-16と共に3時間培養するとladder DNA fragmentationが認められた.この時点における細胞内に依存するMg^<2+>依存性endonucleaseの活性を^3H-E,Coli DNAを基質として測定したところ、無処理のcontrol細胞と比して6倍の上昇が認められた.
2)プロテアーゼ阻害剤によるアポトーシス阻害効果:
Interleukin 1-β-converting enzyme(ICE)阻害剤であるVAD-FMK、セリンプロテアーゼ阻害剤TPCKの両者は非常に強くVP-16によるladder DNA fragmentationを抑制した.TPCKまたはVAD-FMKによりDNA fragmentationが阻害された状態にある細胞のMg^<2+>依存性endonuclase活性を^3H-E.Coli DNAを基質として測定したが、未処理control細胞と比して有意差を認めなかった.
【結論と考察】白血病細胞HL-60にetoposideを作用させアポトーシスを誘導した際には、Mg^<2+>依存性endonuclease活性化されapoptosisが誘導されることが示唆される.また、このendonucleaseの活性化過程においては、ICEまたはICEと類似の酵素、およびセリンプロテアーゼが関与していると考えられる.
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