電気穿孔法による口腔細菌の耐酸性遺伝子のS.sanguisへの導入と発現

• 研究課題/領域番号: 07772012
• 研究種目: 奨励研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 矯正・小児・社会系歯学
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 畑 真二 東北大学, 歯学部, 助手 (20208507)
• 研究期間 (年度): 1995
• 研究課題ステータス: 完了 (1995年度)
• 配分額: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円); 1995年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
• キーワード: う触 / 口腔レンサ球菌 / plasmid / 耐酸性遺伝子

研究概要

ウ触象牙質からの耐酸性細菌の単離
歯垢からはpH4の寒天培地に成育する細菌を分離することはできなかったが、ウ触象牙質からはpH4の寒天培地に成育する細菌を単離することができた。同定の結果Streptococcusであることがわかったが、Bergeyのマニュアルのどの口腔レンサ球菌にも属さないことが判明した。
S.sanguis ATCC 35105の低pH感受性mutantの作成
S.sanguis ATCC 35105はplasmidにより形質転換可能な口腔レンサ球菌である。通常pH5.5の寒天培地に成育するが、Ethyl methansulfonate処理によって突然変異させ、pH5.5の寒天培地に成育しないmutantを得ることができた。
S.sanguis ATCC 35105を形質転換するplasmidの開発
3種類のLactococcus lactisより3種類のplasmidをAnderson & McKayの方法により抽出した。pGB301,pIL252,pIL253である。pIL253が最も回収率が良く、unique restriction siteも多いが、形質転換効率はpGB301が最も優れていることがわかった。
分離した耐酸性口腔レンサ球菌、S.mutans, S.sobrinus, S.sanguisからchromosomal DNAを抽出し、制限酵素で部分消化の条件を夫々に検討した。現在、完全消化および部分消化した1-5Kbのchromosomal DNAを3種類のplasmidにligationし、mutant S.sanguis ATCC 35105を電気穿孔法により形質転換し、耐酸性を回復させる(pH5.5ないしpH5.4の寒天培地に成育するようになる)遺伝子を検索中である。