| 研究課題/領域番号 |
07807016
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
薬理学一般
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
小川 靖男 順天堂大学, 医学部, 教授 (50103841)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1996年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
1995年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
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| キーワード | カエル / 骨格筋 / 膜電位センサー / ジヒドロピリジン受容体 / Ca^<2+>遊離 / ジトビロピリジン受容体 |
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| 研究概要 |
今迄の研究から哺乳類骨格筋の興奮収縮連関は以下の様に理解されている。即ち筋が興奮すると筋形質膜上に起った膜電位変化をT管上にある膜電位センサー(ジヒドロピリジン受容体DHPRと同定されている)が感受し、なんらかの方法でこの情報を向い合った筋小胞体膜上に存在するリアノジン受容体RyRに伝達し、RyRからCa^<2+>が遊離される。我々はカエル骨格筋にはα-,β-RyRと2種類の異ったRyRアイソフォームがほぼ当量ずつ存在すること、さらにそれぞれを単離精製し、その性質を調べた。しからば膜電位センサーにも2種類あるのか否かを明らかにすることが本研究の目的である。前年度はカエル骨格筋よりミクロソーム分画を調製し[^3H]PH200-110結合活性を検討し、哺乳類と同様にカエルでもDHPRが膜電位センサーであることの傍証を得た。本年度はカエル骨格筋DHPRα_<1S>サブユニットのcDNAクローニングに集中した。カエル下肢骨格筋からmRNAを精製し、オリゴ(dT)プライマーを用いてカエル骨格筋のcDNAライブラリー(2×10^<10>pfu/ml)を作製した。次にウサギ、マウス、コイの各α_<1S>サブユニットのcDNAの塩基配列のアライメントより、カエル骨格筋DHPR単離のためのプライマーを作成し、カエル骨格筋のtotal RNAからPCR法にてDHPRの700bpフラグメントを単離した。塩基配列は予想した通り、既報のものと相同性が高い。単離したカエル骨格筋のDHPRの700bpフラグメントを用いてカエル骨格筋のcDNAライブラリーをスクリーニングした。Northern blotで約6kbのsingle bandが得られた。更に制限酵素EcoRIのマッピングのパターンから24種類の独立したクローンが得られた。現在この塩基配列を決定中である。α_<1S>サブユニットは1種類と予想されるが、他の構成サブユニット、例えばβ-サブユニットについても解析を進める予定である。
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