| 研究課題/領域番号 |
07807164
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
小児外科
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| 研究機関 | 聖マリアンナ医科大学 |
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研究代表者 |
中田 幸之介 (中田 幸之助) 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助教授 (70081734)
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| 研究分担者 |
小泉 宏隆 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 講師 (10215155)
高桑 俊文 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助教授 (90121201)
脇坂 宗親 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助手 (30267596)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1997
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| 研究課題ステータス |
完了 (1997年度)
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| 配分額 *注記 |
2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
1997年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1996年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
1995年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | 神経芽腫 / アポトーシス / Fas / caspase-3 / 神経芽腫群腫瘍 / Apoptosis / bcl-2 |
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| 研究概要 |
従来報告してきた神経芽腫におけるApoptoslsの発現機序を理解するため、Fasおよびその関連物質(蛋白)の発現状態を観察した。
対象と方法:神経芽腫組織のparafin切片を用い,その32検体でFasを、また46検体でFas ligand,およびcaspase-3に対するImmunoperoxydase染色を施行した。さらに神経芽腫組織溶解液中のFas,FasL,caspase-3の発現をWestern blot法により分析し、基質中のcaspase-3様活性についてTyramideシグナル増幅法(TSA)を用いて分析した。caspase-3様活性を呈した腫瘍についてはAc-DEVD-Hpeptideを用いたInhibition assayを行った。
結果:神経芽腫組織中のFas発現率はわずか12%であった。Fas発現腫瘍においても発現部位陽性細胞の局在とapoptosis発現部位は一致しなかった。これに比べFasLは検索した組織検体全例に発現した。その発現は神経芽腫あるいは節芽腫で、またstageII〜IVの症例で強い傾向にあった。Western blot分析では10例中8例に約40kDaのFasL蛋白帯が検出された。caspase-3も様々な程度で発現し、10例中4例に著しいcaspase-3様活性を認め、それらはcaspase-3に特異なInhibitorであるAc-DEVD-Hによって著明に抑制された。
考察とまとめ:神経芽腫組織中はFasLを好発現するがFasは少数の非apoptosis腫瘍細胞に存在し、FasLおよびcaspase-3の発現は著しかった。caspase-3はDNA fragmentationを導く蛋白体の一つであり,神経芽腫におけるapoptosisの発現はおそらくFas非介在性の発言経路によるものと考えられた。
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