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新規に輸送ポンプで発見した多重リン酸化部位の構造-構能相関と調節の分子機構

研究課題

研究課題/領域番号 08044047
研究種目

国際学術研究

配分区分補助金
応募区分共同研究
研究分野 機能生物化学
研究機関北海道大学

研究代表者

谷口 和弥  北海道大学, 大学院・理学研究科, 教授 (40028204)

研究分担者 POST Robert  ペンシルベニア大学, 医学部, 教授
MARDH Sven  リンシェピング大学, 生命科学部, 教授
FROEHLICH Je  米国国立衛生研究所, 疫年学研究センター・部長, 教授
SCHONER Wilh  ユスタス リービッヒ大学, 生化学・内分泌学, 教授
嘉屋 俊二  北海道大学, 大学院・理学研究科, 助教授 (90186023)
FROERHIC Jef  米国国立衛生研究所, 老年学研究センターメリーランド大学, 部長教授
ALBERS Wayne  米国国立衛生研究所, 神経科学研究所, 酵素化学部部長
今川 敏明  北海道大学, 大学院・理学研究科, 助教授 (20142177)
WILHELM Scho  ユスタス リービッヒ大学, 生化学・内分泌学, 教授
JEFFREY Froe  米国国立衛生研究所, 老年学研究センター, 部長 教授
SVEN Mardh  リンシェピング大学, 生命科学部, 教授
研究期間 (年度) 1996 – 1997
研究課題ステータス 完了 (1997年度)
配分額 *注記
9,200千円 (直接経費: 9,200千円)
1997年度: 4,600千円 (直接経費: 4,600千円)
1996年度: 4,600千円 (直接経費: 4,600千円)
キーワードphosphorylation / dephosphorylation / protein kinase / protein phosphatases / H-pump / H,K-ATPase / H,K‐ATPase / プロテインキナーゼC / チロシンキナーゼ / キナーゼ / 胃壁H^+ポンプ / ATPase / リン酸化 / 脱リン酸化 / カルシウムイオン / Na^+ポンプ
研究概要

H,K-ATPase触媒鎖Tyr-10とTys-7のkinaseによるリン酸化はCaに依存せず一方Ser-27のそれはCaを要求することが明かになった。またこれらリン酸化に関与するProtein kinasesとPhosphatasesの同定を試みた結果、Ser-27のリン酸化には80kDのconventional PKCがTyr残基のリン酸化にはSRCのC-末端部位に対する抗体とは反応するが、N-末端部位に対する抗体、Yes及びLynに対する抗体とも反応しない、新奇の60kDのTyr-kinaseの関与が明かにされた。一方Phosphatasesについて免疫学的に区別しうる数種の活性の存在があきらかにされたが、脱リン酸化に直接関与する分子種の同定にはいたらなかった。又同一の触媒鎖のTyrとSer残基が同時にリン酸化を受けるか否かにかんしては、否定的な結果がえられた。外来性の基質を添加しても両kinasesはもっぱらH,K-ATPase触媒鎖N-terminalのリン酸化のみを行い、表面活性剤の存在で初めて添加した基質がリン酸化された。これらの結果その他はH,K-ATPase触媒鎖N-terminalのごく近くに、特異的にTry-10,Try-7及びSer-27残基の可逆的リン酸化を行う酵素系が存在することを示唆している。これらリン酸化に伴う酵素活性の変動は現在迄のところ、検出できていない。これらの結果は可逆的リン酸化が酵素活性を調節するよりむしろ細胞骨格蛋白との相互作用に関与している可能性も示唆している。

報告書

(3件)
  • 1997 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1996 実績報告書
  • 研究成果

    (31件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (31件)

  • [文献書誌] K.Togawa: "Ser-27, Try-10 and Try-7 in the alpha-chain of Pig Stomach H,K-ATPase as Ca Dependent Phosphorylatable sites by Intrinsic and Extrinsic Protein kinases." Biochem.Biophys.Res.Commum. 227. 810-815 (1996)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] D.Kane: "Stopped-flow kinetic investigations of conformational changes of Pig kidney Na,K-ATPase." Biochemistry. 36. 13406-13420 (1997)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] H.Eguchi: "ATP Induced Dynamic Fluorescence changes of N-〔P-(2-benzimidazoly)phenyl〕maleimid probe at lyg-241 in the alpha-chain of Pig stomach H,K-ATPase." J.Biochem.122. 659-665 (1997)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Tsuda: "Are pyridoxal and fluorescein probes in lysine residues of d-chain in Na,K-ATPase sensing ATP binding?" Ann.N.Y.Acad.Sci.834. 186-193 (1997)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] S.Kaya: "Cloning of the Eel Electroplax Na,K-ATPase Subunit." Ann.N.Y.Acad.Sci.834. 129-131 (1997)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] J.P.Froehlich: "Complex kinetic Behavior in the Na,K-and Ca-ATPases." Ann.N.Y.Acad.Sci.834. 280-296 (1997)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K.Togawa: "Phosphorylation of Tyr-7,Tyr-10,and ser-27 of alpha-chain in H.K.ATPase by Intrinsicand Extrinsic kinases." Ann.N.Y.Acad.Sci.834. 582-584 (1997)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Tsuda: "Fluorescein 5'-Isothiocyanate-Modified Na,K-ATPase at Lys-501 of the alpha-chain,Accepts ATP Independent of pyridoxal 5'-Diphospho-5'-Adenosine Modification at Lys-480." J.Biochem.123. 169-174 (1998)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Imagawa: "Does Binding of Ouabain to Human alpha 1 subunit of Na,K-ATPase Affect the ATPase Activity of Adjacent Rat alpha 1 subunit?" Jpn.J.Pharmacal.(in press).

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Tsuda: "ATP and Acetyl phosphate Induce Mokcular Events near the ATP binding Site and the Domain in Na,K-ATPase:The Terameric Nature of the Enzyme." J.Biol.Chem.(in press).

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K.Togawa: "Ser-27, Tyr-10 and Tyr-7 in the alpha-Chain of Pig Stomach H,K-ATPaseas Ca Dependent Phosphorylatable sites by Intrinsic and Extrinsic Protein Kinases." Biochem.Biophys.Res.Commun. 227. 810-815 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] D.Kane: "Stopped-flow Kinetic investigationsof Conformational Changes of Pig Kidney Na, K-ATPase." Biochemistry. 36. 13406-13420 (1997)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] H.Eguchi: "ATP Induced Dynamic Fluorescence Changes of N-[p-(2benzimidazolyl)phenyl] maleimide Probe at Cys-241 in the alpha-Chain of Pig Stomach H,K-ATPase." J.Biochem.122. 659-665 (1997)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Tsuda: "Are pyridoxal and fluorescein probes in lysine residues of alpha-chain in Na, K-ATPase sensing ATP binding?" Ann.N.Y.Acad.Sci.834. 186-193 (1997)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] S.Kaya: "Cloning of the Eel Electroplax Na, K-ATPase Subunit." Ann.N.Y.Acad.Sci.834. 129-131 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] J.P.Froehlich: "Complex Kinetic Behavior in the Na, K- and Ca-ATPases." Ann.N.Y.Acad.Sci.834. 280-296 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K.Togawa: "Phosphorylation of Tyr-7, Tyr-10, and Ser-27 of alpha-Chain in H,K-ATPase by Intrinsic and Extrinsic Kinases." Ann.N.Y.Acad.Sci.834. 582-584 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Tsuda: "Fluorescein 5'-Isothiocyanate-Modified Na, K-ATPase at Lys-501 of the alpha-Chain, Accepts ATP Independent of Pyridoxal 5'-Diphospho-5'-Adenosine Modification at Lys-480." J.Biochem. 123. 169-174 (1998)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Imagawa: "Does Binding of Ouabain to Human alpha 1 Subunit of Na, K-ATPase Affect the ATPaseActivity of Adjacent Rat alpha 1 Subunit?" Jpn.J.Pharmacal.(in press).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Tsuda: "ATPand Acetyl Phosphate Induce Molecular Events near the ATP binding Site and the Domain in Na, K-ATPase : The Terameric Nature of the Enzyme." J.Biol.Chem.(in press).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] D.J.Kane: "Stopped-Flow Kinetic Investigations of Conformational Changes of Pig Kidney Na^+,K^+-Atpase" Biochemistry. Vol36,No43. 13406-13420 (1997)

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      1997 実績報告書
  • [文献書誌] T.TSUDA: "Are Pyridoxal and Fluorescein Probes in Lysine Residues of α-chain in Na^+,K^+-ATP ase sensing ATP Biding?" Ann.N.Y.Acad.Sci.834. 186-193 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] J.P.FPOEHLICH: "Complax Kinetic Behavior in the Na,K-and Ca-Atpases" Ann.N.Y.Acad.Sci.834. 280-296 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] K.TOGAWA: "Prosphorylation of Tyr^7,Tyr^<10>,and Ser^<27> of α-Chain in H^+,K^+-ATPuse by intrinsic and Fxtrinsic Kingses" Ann.N.Y.Acad.Sci.834. 582-584 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] S.KAYA: "Cloning of the Eel Electroplax Na^+,K^+-ATPase α Subunit" Ann.N.Y.Sci.834. 129-131 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] H.Eguchi: "ATP-Induced Pypamic Fluorescence Changes of an-[P-(2-benzimidolyl)phenyl]maleimide probe at cys in the α-Chain of Pig Stomach H^+,K^+ATPase" J.Biochem. 122. 659-665 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] T.TSUDA: "Fluorescein 5‘-Isothiocyanate-modified Na,ATPase,at Lys-501 of the α-Chain,Accepts ATP Independent of Pyridoxal 5'-Piphospho-5‘Adenosine Modification at Lys-480" J.Biochem. 123. 169-174 (1998)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] K.Togawa: "Ser27,Tyr10 and Tyr7 in the α-Chain of Pig Stomach H+,K+-ATPase as Ca2+ Dependent Phosphorylatable sites by Intrinsic and Extrinsic Protein Kinases" Biochem.Biophys.Res.Commun.227. 810-815 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] T.Tsuda: "Are pyridoxal and Fluorescein Probes in Lysine Residues of α-Chain in Na^+,K^+-ATPase Sensing ATP Binding?" Ann.New York.Acad.Sci.(in press). (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Jeffrey P.Froehlich: "Complex Kinetic Behavior in the Na,K-and Ca-ATPases ; Evidence for Subunit-subunit Interactions and Energy Conserbation During Catalysis" Ann.New York.Acad.Sci.(in press). (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Katsuhiko Togawa: "Phosphorylation of Tyr^7,Tyr^<10> and Ser^<27> of α Chain in H^+,K^+-ATPase by Intrinsic and Extrinsic Kinases" Ann.New York.Acad.Sci.(in press). (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書

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公開日: 1996-04-01   更新日: 2016-04-21  

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