| 研究課題/領域番号 |
08044203
|
|---|
| 研究種目 |
国際学術研究
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 共同研究 |
|---|
| 研究分野 |
構造生物化学
|
|---|
| 研究機関 | 大阪大学 |
|---|
研究代表者 |
福山 恵一 大阪大学, 大学院・理学研究科, 教授 (80032283)
|
|---|
| 研究分担者 |
大岡 宏造 大阪大学, 大学院・理学研究科, 助手 (30201966)
高橋 康弘 大阪大学, 大学院・理学研究科, 講師 (10154874)
佐伯 和彦 大阪大学, 大学院・理学研究科, 講師 (40201511)
FEVZI Daldal Univ. of Pennsylvania Dept. of Biology, 教授
DALDAL Fevzi Univ.of Pennsylvania Dept.of Biology, Professor
DALDAL Fevzi ペンシルバニア大学, 生物学科, 教授
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1996 – 1998
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
|
| 配分額 *注記 |
9,900千円 (直接経費: 9,900千円)
1998年度: 3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
1997年度: 3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
1996年度: 3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
|
|---|
| キーワード | チトクロム / 分子標識 / 光合成細菌 / 膜蛋白質 / 電子伝達系 / 膜蛋白質複合体 / Rhodobacter / 鉄硫黄センター / チトクロムbc1複合体 / 迅速精製 / 結晶化 / 呼吸酵素 |
|---|
| 研究概要 |
呼吸鎖電子伝達系複合体における電子伝達に伴うプロトン濃度勾配の形成は,生物のエネルギー獲得の重要なプロセスである。光合成細菌チトクロムbc_<1l>複合体は、真核生物のミトコンドリアのものと比べ単純な構造を持つが、反応機構は相同と考えられている。本研究では、
1) Rhodobacter capsulatusチトクロムbc_1複合体の分子標識付加の精製の迅速簡便化:Rieske蛋白質のC末端およびチトクロムc_1のC末端にHisを6残基付加する改変遺伝子2種を作製して、改変遺伝子とそれ以外のサブユニットの野生型遺伝子を保持させたプラスミドを構築した。Ni-カラム、イオン交換カラムとゲルろ過カラムを用いた3段階の精製で得た標品はほぼ純粋であった。
2) 分子標識付加チトクロムbc_1複合体のみを含むRhodobacterの成長能:改変遺伝子を保持させたプラスミドをチトクロムbc_1複合体を欠き光合成能を喪失した変異株MT-RBC1に導入して性質を調べた。2種の標識付加体を持つ株がいずれも光合成能を回復することを確認した。
3) 分子標識付加チトクロムbc_l複合体の分光学解析:クロマトフオア膜中の2種のHis配列付加チトクロムbc1複合体の酵素化学的性質を、フラッシュ照射により解析した。その結果、Rieske蛋白質とチトクロムc_1それぞれのC末端にHis6残基を付加した複合体のターンオーバーは、野生型の約70%と約90%であった。
4) 分子標識付加R.capsulatusチトクロムbC_1複合体の結晶化・結晶解析:2種の迅速精製標品のうちRieske蛋白質にHis6残基を付加したものについては、昨年度得られた微結晶の成長条件を検討したが、未だX線解析を行うのに十分な大きさのものは得られていない。
|
