| 研究概要 |
本研究は,植物細胞では液胞が空間充填コンパートメントとして機能していることに着目し,植物の個体構築と液胞の機能とを分子レベルで記述することを目的とした.
シロイヌナズナ液胞膜シンタクシンAtVam3pのセンス発現系を導入した形質転換体を構築した.抗AtVam3p抗体を用いて免疫ブロット解析を行った結果,このラインは導入遺伝子をヘテロ接合体に持つ場合,AtVam3pの発現量が増加している一方,ホモ接合体で持つ場合にはその発現量が著しく低下していた.これはおそらくco-suppressionによる発現量の低下に起因するものと思われる.これらのtransgenicラインにおいては,背丈が野生型に比べて若干,低くなることが観察された.植物の遺伝子の探索と平行して,酵母における遺伝子解析を進めた.Vam2p,Vam6pは他のタンパク質と顕著な相同性を示さず,構造からその機能を類推することはできない.Vam2p,Vam6pの動態をepitope-tagging,あるいはgreen fluorescent protein(GFP)との融合タンパク質の発現などの手法で解析した結果、これらのタンパク質は細胞内で大きなタンパク質複合体を形成すること,またGFP-Vam6pは液胞膜上の数カ所に多く存在することが示された.また,Vam3pも,液胞膜上に均一に分布しているのではないことが免疫蛍光顕微鏡法により示された。以上の観察結果は,液胞膜の一部分が膜融合のために特殊化されている可能性を示している.
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