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細胞内アスパラギン酸プロテアーゼの機能構造形成と細胞機能制御

研究課題

研究課題/領域番号 08278224
研究種目

重点領域研究

配分区分補助金
研究機関九州大学

研究代表者

山本 健二  九州大学, 歯学部, 教授 (40091326)

研究分担者 坂井 英昭  長崎大学, 歯学部, 助教授 (40225769)
筑波 隆幸  九州大学, 歯学部, 助手 (30264055)
中西 博  九州大学, 歯学部, 助手 (20155774)
研究期間 (年度) 1996
研究課題ステータス 完了 (1996年度)
配分額 *注記
2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
1996年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
キーワードカテプシンE / カテプシンD / 生合成 / 選別輸送機構 / プロセシング / ミクログリア / 胸腺細胞 / 細胞内アスパラギン酸プロテアーゼ
研究概要

カテプシンEおよびDは動物細胞における主要な細胞内アスパラギン酸プロテアーゼである。カテプシンDが典型的な可溶性リソソーム酵素として広く組織・細胞に分布しているのに対し、カテプシンEは非リソソーム酵素として限定的な分布をし、組織・細胞の違いによって細胞質型または細胞膜型、あるいはその両方の存在様式をとる。両酵素は明らかに糖蛋白質であり、その前駆体はシグナルペプチド、プロ部を有していることから、粗面小胞体上のリボソームで合成された後、古典的分泌経路でゴルジ野に運ばれるものと考えられる。しかし、両酵素、とくにカテプシンEの選別・輸送および活性分子への変換機構については不明の部分が多い。本研究では、マウス白血病フレンド細胞やラット胸腺細胞、ラットミクログリア細胞などの種やタイプの異なる細胞を用いて、カテプシンEの生合成や細胞内輸送ならびに局在化機構をカテプシンDのそれらと対比させて解析した。実験は、^<35>S-メチオニンを用いたパルス・チェイス実験により行われた。経時的に細胞と培養上清を回収し、細胞成分は界面活性剤で抽出した後、両酵素に対する特異抗体で免疫沈降を行い、ゲル電気泳動とフルオログラフィーで解析した。得られた結果は以下のとうりである。(1)カテプシンDはいずれの細胞においても同じキネティックスで生合成とプロセシングが行われ、数時間のうちにリソソームへ輸送され活性型酵素へ変換された。一方、(2)カテプシンEの生合成や細胞内輸送ならびに局在化機構は用いた細胞で著しい相違を示した。即ち、ミクログリア細胞では、カテプシンDと同様のキネティックスで生合成とプロセシングを受け、成熟型酵素として酸性コンパートメントへ輸送されたが、フレンド細胞や胸腺細胞では、中間型酵素の段階までしかプロセシングが行われず、この分子はトロンスゴルジあるいはTGNまで輸送されてプールされる形で貯留した。

報告書

(1件)
  • 1996 実績報告書
  • 研究成果

    (12件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (12件)

  • [文献書誌] Tsukuba T.,et al.: "Biochemical properties of the monomeric mutant of human cathepsin E expressed in Chinese hamster ovary cells:Comparison with dimeric forms of the natural and recombinant cathepsin E." J.Biochem.119. 126-134 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Matsuo K.,et al.: "Immunohistochemical localization of cathepsins D and E in human gastric cancer.A possible correlation with local invasive and metastatic activities of carcinoma cells." Human Pathol.27. 184-190 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Kouzuma Y.,et al.: "Purification,characterization,and sequencing of two cysteine proteinase inhibitors,Sca and Scb,from Sunflower(Helianthus annuus)." J.Biochem.119. 1106-1113 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Nakayama K.,et al.: "Involvement of arginine-specific cyeteine proteinase(Arg-gingipain) in fimbriation of Porphyromonas gingivalis." J.Bacteriol.178. 2818-2824 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Azuma T.,et al.: "Expression of cathepsin E in pancreas:A possible tumor marker for pancreas,a preliminary report." Int.J.Cancer. 67. 492-497 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Okamoto K.,et al.: "Cloning and sequencing of the gene encoding a novel lysine-specific cysteine proteinase(Lys-gingipain) in Porphyromonas gingivalis:Structural relationship with arginine-specific cysteine proteinase(Arg-gingipain)." J.Biochem.120. 398-406 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Nishishita K.,et al.: "Age-related and dexamethasone-induced changes in cathepsins E and D in rat thymic and splenic cells." Arch.Biochem.Biophys.333. 349-358 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Nakanishi H.,et al.: "Increased expression of cathepsins E and D in neurons of the aged rat barin and their colocalization with lipofusoin and carboxy-terminal fragmnets of Alzheimer amyloid precursor protein." J.Neurochem.68. 739-749 (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Kunimatsu K.,et al.: "Immunohistochemical study of cathepsin G and medullasin in inflamed gingival tissues from periodontal patients." J.Periodont.Res.(in press). (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Yamamoto K.,et al.: "Intracellular Protein Catabolism" Plenum Press(New York), 306 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Yamamoto K.,et al.: "Medical Aspects of Proteases and Protease Inhibitors" IOS Press(in press), (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Yamamoto K.,et al.: "Proteolysis and Protein Turnover" IOS Press(in press), (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書

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公開日: 1996-04-01   更新日: 2016-04-21  

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