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反芻類家畜における形質転換動物の作出と応用に関する基礎研究

研究課題

研究課題/領域番号 08406018
研究種目

基盤研究(A)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 応用動物科学
研究機関東京大学

研究代表者

東條 英昭 (1997-1998)  東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (20041668)

舘 鄰 (1996)  東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (30011711)

研究分担者 山内 啓太郎  東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助手 (70272440)
酒井 仙吉  東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (80114487)
澤崎 徹  東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (00012047)
高橋 迪雄  東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (30011943)
舘 鄰 (舘 隆)  麻布大学, 獣医学部, 教授 (30011711)
東條 英昭  東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (20041668)
研究期間 (年度) 1996 – 1998
研究課題ステータス 完了 (1998年度)
配分額 *注記
34,300千円 (直接経費: 34,300千円)
1998年度: 5,600千円 (直接経費: 5,600千円)
1997年度: 7,700千円 (直接経費: 7,700千円)
1996年度: 21,000千円 (直接経費: 21,000千円)
キーワードトランスジェニック動物 / EGFP / PCR / DPnI / マウス胚 / トランスジェニック / 形質転換家畜 / 遺伝子導入 / α-ガラクトース / 制限酵素 / 蛍光蛋白 / 胚 / トランスジーン / シバヤギ / ホメオボックス / c-kit / SCF
研究概要

1.シバヤギc-kit cDNAに見い出された特異的アラニン残基の挿入について、各種の動物を解析した結果、ウシ科の中でもヤギ、ヒツジに特異的な挿入であることが判明した。c-kitのリガンドであるSCFcDNAのクローニングを行なった結果、5つのisoformsが単離された。そのうちの二つは、従来報告されている動物種にない、新規のSCFのisoformsであった。2.マウスおよびシバヤギの胎盤形成過程におけるホメオボックス含有遺伝子群の関与について検討した。Degenerate oligonucleotide primeを用いたRT-PCR法による解析の結果、両動物種の胎盤において多数のホメオボックス遺伝子の発現が同定され、Hox a9,d9,Emx2.Msx2,ATBFIが、両動物種で共通して発現していた。また、Hox 09,d9の発現が胎盤形成過程において何らかの役割を果たしていることが示唆された。3.形質転換動物の作出効率を向上させる手段して、Bal 31とDpn IによるDNA消化とPCRとを併用したTg胚の選別を試みた。細胞質にDNAを注入し体外で後期胚に発生させたウシおよびマウス胚の98.6%で特異PCR産物は全く検出されなかった。一方、Tg胚のゲノムDNAを酵素処理した場合には、68.6%の胚でトランスジーンに特異的なPCR産物が検出された。また、70.5%のウシ胚でマーカー遺伝子に特異的なPCR物が検出され、Tg胚の選別に極めて有効であることが認められた。4.EGFPをマーカーとしてTg胚の選別法について検討した。受精卵前核にCMV・β-actin/EGFP遺伝子を顕微注入し生存胚を体外培養した。後期胚について蛍光顕微鏡で観察し、14.8%が胚全体で、22.6%がモザイク様の蛍光が観察された。つぎに、モザイク様に発光した胚と全体に発光した胚とに分類し偽妊娠ICRマウスの子宮へ移植した。前者から76.9%、後者から21.6%のTgマウスが得られた。本手法が、Tg胚の選別に極めて有効であることが認められた。

報告書

(4件)
  • 1998 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1997 実績報告書
  • 1996 実績報告書
  • 研究成果

    (37件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (37件)

  • [文献書誌] Ikeda A: "Different female reproductive phenotypes determined by human growth hormone (hGH) levels in hGH-transgenic rats" Biol.Reprod.,. 56. 847-851 (1997)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Seo B.B: "Efficient selection of preimplantaion transgenic embryos by the improved procedures of the Dpn I-Bal 31 digestion and polymerase chain reaction" Reprod.Fetril.Dev.,. 9. 263-269 (1997)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tanaka S: "Cell-cell contact down-regulates expression of membrane type metalloproteinase-I (MT-MMP) in a mouse mammary gland epitherial cell line" Zool.Sci.,. 14. 95-99 (1997)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sasaki F: "Growth hormone releasing hormone (GHRH)^GH-somatic growth and luteinizing hormone (LH) RH-LH-ovarian axes in adult female transgenic mice expressing human GH gene." J.Neuroendocri.,. 9. 615-626 (1997)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Toyooka Y: "Wilms' tumor suppressor gene (WT1) as a target gene of SRY function in a mouse ES cell line transfected with SRY." Int.J.Dev.Biol.42. 1143-1151 (1998)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kano K: "Skeletal muscle of transgenic mice expressing human sonoN,a homologue of c-ski." J.Reprod.Develop.,. 44. 253-260 (1998)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 東條英昭: "動物をつくる遺伝子工学" 講談社, 227 (1996)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tanaka S,et al.: "Molecular cloning of c-kit encoding the c-kit receptor of Shiba goats and a novel alanine insertion specific to goats and sheep in the kinase insert region." Biochem.Biophys.Acta.1352. 151-155 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tanaka S,et al: "Cell-cell contact down-regulates expression of membrane type metalloproteinase-1 (MT-MMP) in a mouse mammary glad epitherial cell line." Zool.Sci.14. 95-99 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Seo B.B,et al: "Efficient selection of preimplantation transgenic embryos by the improved procedures of the Dpm I-Bal 3I digestion and polymerase chain reaction" Reprod.Fetril.Dev.9. 263-269 (1997)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Inoue K,et al.: "Quantitative analysisi of striped coat-color patterns in large white/Duroc chimeric pigs with special reference to the genetic control mechanisms of the dominant black eyed white phenotype." Pigment Cell Res.9. 289-297 (1997)

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    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ikeda A,et al: "Different female reproductive phenotypes determined by human growth hormone (hGH) levels in hGH-transgenic rats" Biol.Reprod.56. 847-851 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sasaki F,et al: "Growth hormone releasing hormone (GHRH)^GH-somatic growth and luteinizing hormone (LH) RH-LH-ovarian axes in adult female transgenic mice express-ing human GH gene." J.Neuroendocri.9. 615-626 (1997)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yamanouchi K.: "Equine inhibin/actibin subunit is expressed in the endometrial gland, but not in the trophoblast, during pregnancy." J.Reprod.Devlop.47. 363-369 (1997)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yamanouchi K,et al: "Expression and cellular localization of inhibin alpha-subunit mRNA in equine fetal gonads." J.Vet.Med.Sci.59. 569-573 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yamanouchi K,et al: "Studies on expression of the c-ski gene in equine (Thouroughbred) tissues." J.Equine Sci.8. 13-19 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kano K,Tojo H,et al.: "Skeletal muscle of transgenic mice expressing human snoN,a homologue of c-ski." J.Reprod.Develop.44. 253-260 (1998)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Toyooka Y,et al.: "Wilms'tumor suppressor gene (WT1) as a target gene of SRY function in a mouse ES cell line transfected with SRY." Int.J.Dev.Biol.42. 1143-1151 (1998)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ikeda A: "Different female reproductive phenotypes determined by human growth hormone (hGH) levels in hGH-transgenic rats." Biology of Reproduction.56. 847-851 (1997)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Sasaki F: "Growth hormone releasing hormone-GH-somatic growth and luteininzing hormone RH-LH-ovarian axes in adult female transgenic mice" Journal of Neuroendocrinology. 9. 615-626 (1997)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Tanaka S: "Molecular cloning of c-kit encoding the c-kit receptor of Shida goats and a novel alanine insertion specific to goats and sheep inthe kinase." Biochemica Biophysica Acta.1352. 151-155 (1997)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Seo B.B: "Efficient selection of preimplantaion transgenic embryos by the improved of the Dpn l-Bal 31 digestion and polymerase chain reaction." Reproduction, Fertility and Development. 9. 263-269 (1997)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Kano K: "Skeletal muscle of transgenic mice expressing human snoN, a homologue of c-ski." Jouranl of Reproduction and Development. 44. 253-260 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Toyookoa Y: "Wilm's tumor suppressor gene (WT1) as a target gene of SRY function in a mouse ES cell line transfected with SRY." International Journal of Development and Biology. 42. 1143-1151 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Suenaga A: "Quantitative analysis of the spreading of the mouse trophoblast in vitro : a model for early invasion." Placenta. 17. 583-590 (1996)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Hirota O.: "Effects of transfected human and mouse SRY/Sry genes upon the expression of hypothtical SRY・caseade genes in cultured mouse sertoli cell" Journal of Reproduction and Development. 42. 255-265 (1996)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Hase W: "Transgenic mice overexpressing forein whey acidie WAP genes driven by methallothionein promoter." Journal of Reproduction and Development. 42. 235-271 (1996)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Nagasawa H: "Changes of plasma level of human growth hormone with age in relation to mammary tumour appearance in wheyacidic protein/human" in vivo. 10. 503-506 (1996)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Seo B.B: "Efficient selection of preimplantation transgenic embryos by the improved procedures of the Dpn1-Bal 31 digestion and polymerase chain" Reproduction.Fertility and Development. 9. 263-269 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Sasaki F: "Growth hormone releasing hormone (GHRH) GH-somatic growth and luteininzing hormone (LH) RH-LH-ovarian axes in adult female transgenic" Journal of Neuroendocrinology. 9. 615-626 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] 東條英昭: "動物をつくる遺伝子工学" 講談社, 227 (1996)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Suenaga A: "Quantitative analysis of the spreading of the mouse trophoblast in vitro:a model for early invasion." Placenta. 17. 583-590 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Hirota O.: "Effects of transfected human and mouse SRY/Sry genes upon the expression of hypothtical SRY-cascade genes in cultured mouse sertoli cell." Journal of Reproduction and Development. 42. 225-265 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Hase W.: "Transgenic mice overexpressing forein whey acidic WAP genes driven by methallothionein promoter." Journal of Reproduction and Development. 42. 265-271 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Tanaka S.: "Cell-cell contact down-regulates expression of membrane type metallo-proteinase(MT-MMP)in a mouse mammary gland epithrial cell line." Zoological Science. (印刷中).

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Seo B.B,: "Efficient selection of preimplantation transgenic embryos by the improved procedures of the DpnI-Bal 31 digestion and polymerase chain" Reproduction.Fertility and Development. (印刷中).

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Sasaki F: "Growth hormone releasing hormone(GHRH)GH-somatic growth and luteininzing hormone(LH)RH-LH-ovarian axes in adult female transgenic" Journal of Neuroendocrinology. (印刷中).

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書

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公開日: 1996-04-01   更新日: 2016-04-21  

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