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カルシウム/カルモデュリン依存性多機能性蛋白質燐酸化酵素を介する情報伝達機構

研究課題

研究課題/領域番号 08408034
研究種目

基盤研究(A)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 神経化学・神経薬理学
研究機関旭川医科大学

研究代表者

藤沢 仁 (藤澤 仁)  旭川医大, 医学部, 教授 (10027039)

研究分担者 木谷 隆子  旭川医科大学, 医学部, 教務職員 (70101417)
竹内 昌之  旭川医科大学, 医学部, 助手 (40226999)
石田 敦彦  旭川医科大学, 医学部, 助手 (90212886)
亀下 勇  旭川医科大学, 医学部, 助教授 (60127941)
研究期間 (年度) 1996 – 1998
研究課題ステータス 完了 (1998年度)
配分額 *注記
34,600千円 (直接経費: 34,600千円)
1998年度: 5,700千円 (直接経費: 5,700千円)
1997年度: 13,700千円 (直接経費: 13,700千円)
1996年度: 15,200千円 (直接経費: 15,200千円)
キーワードカルシウムイオン / カルモデュリン / 脳 / 蛋白質燐酸化酵素 / シグナル伝達 / 酵素活性の調節機構 / 蛋白質脱燐酸化酵素 / CaMキナーゼカスケード / 蛋白質燐酸化反応 / cDNAクローニング
研究概要

1.カルシウム/カルモデュリン依存性蛋白質燐酸化酵素II(CaMキナーゼII)
(1)CaMキナーゼIIの自己燐酸化部位であるスレオニン-286を特異的に脱燐酸化する酵素が脳に存在することをゲル内アッセイ法で明らかにし、CaMキナーゼIIがスレオニン-286の燐酸化と脱燐酸化によって活性が調節されている可能性を示した。
(2)CaMキナーゼIIのスレオニン-286を特異的に脱燐酸化する新しい蛋白質脱燐酸化酵素をラット脳から純粋に精製し、その性質を明らかにした。
(3)CaMキナーゼIIの遺伝子から発現する蛋白質αKAPの細胞内分布を特異抗体を用いて明らかにした。
2.カルシウム/カルモデュリン/キナーゼ/キナーゼ・カスケード
(1)CaMキナーゼIVが上流のCaMキナーゼキナーゼによって燐酸化される部位を燐酸化ペプチドの解析によりN末端から196番目のスレオニンであることを明らかにした。
(2)CaMキナーゼキナーゼのアイソフォーム(CaMキナーゼキナーゼβ)をラットの小脳からクローニングして組み換え酵素を発現させた。さらにβアイソフォームに特異的な抗体を調整して脳内部位分布を調べ、αアイソフォームの分布と比較した。
(3)CaMキナーゼキナーゼαの組み換え酵素を用いて基質特異性を調べた。
(4)CaMキナーゼIVがCa^<2+>/カルモデュリンによってCaMキナーゼキナーゼ低感受性型酵素に転換されることを見出し、CaMキナーゼカスケードの新しい制御機能の可能性を示した。

報告書

(2件)
  • 1997 実績報告書
  • 1996 実績報告書
  • 研究成果

    (32件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (32件)

  • [文献書誌] S.OKuno: "Purification and Characterization of Ca^<2+>/Calmodulin-Dependent Protein Kinase Kinase β from Rat Cerebellum" J.Biochem. 122(1). 155-160 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] I.Kameshita: "Detection of Protein Phosphatase Activities in Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Using Peptide Substrates" Anal.Biochem.245. 149-153 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] T.Kitani: "Studies on the Site of Phosphorylation of Ca^<2+>/Calmodulin-Dependent Protein Kinase(CaM-Kinase)IV by CaM-Kinase Kinase" J.Biochem. 121. 804-810 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] T.Kitani: "Molecular Cloning of Ca^<2+>/Calmodulin-Dependent Protein Kinase Kinase β" J.Biochem. 121(1). 243-250 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] S.Okuno: "Studies on the Substrate Specificity of Ca^<2+>/Calmodulin-Dependent Protein Kinase Kinase α" J.Biochem. 122. 337-343 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] I.Kameshita: "Detection of Calcium Binding Proteins by Two-Dimensional Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis" Anal.Biochem.249. 252-255 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] I.Kameshita: "A New Peptide Conjugate as a Highly Specific Substrate for MAP Kinase" J.Biochem. 122(1). 168-172 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] M.Takeuchi: "Perinuclear Membrane Localization of α KAP,a Protein Produced from a Gene within the Gene of Calmodulin-Dependent Protein Kinase II α" J.Biochem. 122(3). 494-497 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Y.Hayashi: "Calcium-and calmodulin-dependent phosphorylation of AMPA type glutamate receptor subunits by endogenous protein kinases in the post-synaptic density" Mol.Brain Res.46. 338-342 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] S.Okuno: "Regulation of Ca^<2+>/Calmodulin-Dependent Protein Kinase IV(CaM-Kinase IV)by Changing Its Susceptibility to Phosphorylation by CaM-Kinase Kinase" J.Biochem. 122(5). 897-900 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] A.Ishida: "Assay of Protein Phosphatase Activities with Phosphopeptide-Magnetic Particle Conjugates" Anal.Biochem.254. 152-155 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] K.Hirooka: "Reticalmin:A Novel Calcium/calmodulin-Dependent Protein Kinase IV-like Protein in Rat Retina" Vision Res.37(15). 2029-2033 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] A.Ishida: "A Novel Phosphatase That Dephosporylates and Regulates Ca^<2+>/Calmodulin-dependent Protein Kinase" J.Biol.Chem.273(4). 1904-1910 (1998)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] 奥野 幸子: "蛋白質・核酸・酵素" 共立出版, 6 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] 奥野 幸子: "ブレインサイエンス最前線'98" 講談社, 11 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] A.Ishida: "Kinases and Phosphatases in Lymphocyte and Neuronal Signaling" Spring-Verlag Tokyo, 2 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] K.Yoshida: "Differential Distribution of CaM Kinases and Induction of c-fos Expression by Flashing and Sustained Light in Rat Retinal Cells" Inv.Ophthalmol.Vis.Sci.37・1. 174-179 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] A.Ishida: "Evidence that autophosphorylation at Thr-286/Thr-287 is required for full activation of calmodulin-dependent protein kinase II" Biochim.Biophys.Acta. 1311. 211-217 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Y.Nakamura: "Distribution of Ca^<2+>/calmodulin-dependent protein kinase kinase α in the rat central nervous system : an immunohistochemical study" Neuroscience Letters. 204・1.2. 61-64 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] S.Watanabe: "Inactivation of calmodulin-dependent protein kinase IV by autophosphorylation of serine 332 within the putative calmodulin-binding domain" J.Biol.Chem.271・12. 6903-6910 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] S.Okuno: "Evidence for the Existence of Ca^<2+>/Calmodulin-Dependent Protein Kinase IV Kinase Isoforms in Rat Brain" J.Biochem.119・6. 1176-1181 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] I.Kameshita: "Detection of Protein Kinase Activities toward Oligopeptides in Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel" Anal.Biochem.237・2. 198-203 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] A.Shimomura: "Calmodulin-dependent Protein kinase II Potentiates Transcriptional Activation through Activating Transcription Factor 1 but Not cAMP Response Element-binding Protein" J.Biol.Chem.271・30. 17957-17960 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] R.Sugai: "Molecular Cloning of a Novel Protein Containing the Association Domain of Calmodulin-Dependent Protein Kinase II" J.Biochem.120・4. 773-779 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] S.Okuno: "Purification and Characterization of Ca^<2+>/Calmodulin-Dependent Protein Kinase Kinase β from Rat Cerebellum" J.Biochem.121. 155-160 (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] I.Kameshita: "Detection of Protein Phosphatase Activities in SDS-Polyacrylamide Gel Using Peptide Substrates" Anal.Biochem.(in press).

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] T.Kitani: "Studies on the Site of Phosphorylation of Ca^<2+>/Calmodulin-Dependent Protein Kinase (CaM-Kinase) IV by CaM-Kinase Kinase" J.Biochem.(in press).

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] 石田敦彦: "Clinical Neuroscience" 中外医学社, 4 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] 奥野幸子: "生化学" 日本生化学会, 5 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] 亀下勇: "生化学" 日本生化学会, 4 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] H.Fujisawa: "ELSEVIER" Integrative and Molecular Approach to Brain Function, 4 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] 奥野幸子: "蛋白質・核酸・酵素" 共立出版, 6 (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書

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公開日: 1996-04-01   更新日: 2016-04-21  

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