| 研究課題/領域番号 |
08457485
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
形態系基礎歯科学
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| 研究機関 | 神奈川歯科大学 |
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研究代表者 |
梅本 俊夫 神奈川歯科大学, 歯学部, 教授 (20067036)
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| 研究分担者 |
高橋 祐介 神奈川歯科大学, 歯学部, 助手 (20267511)
浜田 信城 神奈川歯科大学, 歯学部, 助手 (20247315)
吉本 尚 神奈川歯科大学, 歯学部, 助教授 (60084787)
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| 研究期間 (年度) |
1996 – 1998
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| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
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| 配分額 *注記 |
6,900千円 (直接経費: 6,900千円)
1998年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
1997年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
1996年度: 3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
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| キーワード | Periodontopathic bacteia / Porphyromonas gingivalis / Fimbriae / fimA / Transformation / Adhirence factor / Surface hydrophobicity / Coaggregation / 線毛 / 形質転換 / 細胞付着性 / 線毛遺伝子 / fimA不活化株 |
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| 研究概要 |
本研究は歯周病原細菌であるPorphyromonas gingivalisの病原因子のうち線毛、血球凝集素、システインプロテアーゼおよび主要外膜タンパク質などの遺伝子を導入した形質転換株を作製することにより、それらの病原因子の性状を明らかにするとともに、各遺伝子と歯周病原性の関わりを明らかにすることを目的として行った。
すなわち、細胞への付着や他の細菌との共凝集に関与すると考えられている線毛の遺伝子(fimA381)を他のP.gingivalis菌株へ形質転換することにより、線毛の機能について検討した。P.gingivalisの形質転換はfimA381を含むプラスミドpYHF1をプラスミド受容株であるYH522株に伝達して複製した後回収したpYHF1を用いてエレクトロポレーションにより行った。fimA381の遺伝子発現はSDS-PAGEにおける41kタンパクの発現と特異抗体を用いたウエスタンブロッティングにより確認し、菌体表層におけるリコンビナント線毛の発現は電子顕微鏡を用いたネガティブ染色像と特異抗体を用いたイムノゴールド法により確認した。その結果、供試した5株において381株由来の線毛の発現が認められた。次いで、形質転換株とそれぞれの親株を用いて、菌体表層の疎水性、細胞への付着能、他菌種との共凝集性および血球凝集能を比較したところ、リコンビナント線毛が形成された形質転換株はいずれも親株と比較して血球凝集能を除いて、菌体表層の疎水性、細胞付着能および他菌種との共凝集性が低下する傾向が認められた。これらの結果からfimA38
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