| 研究課題/領域番号 |
08458186
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(B)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
構造生物化学
|
|---|
| 研究機関 | 愛知医科大学 |
|---|
研究代表者 |
木全 弘治 愛知医科大学, 分子医科学研究所, 教授 (10022641)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1996 – 1997
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1997年度)
|
| 配分額 *注記 |
6,300千円 (直接経費: 6,300千円)
1997年度: 2,900千円 (直接経費: 2,900千円)
1996年度: 3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
|
|---|
| キーワード | PG-M / バ-シカン / 抗-接着 / コンドロイチン硫酸 / アネキシンVI / 点接着アッセイ / コンドロイチン硫酸レセプター / シグナル伝達 / 細胞伸展 / 抗-接着活性 / グリコカルフィン / コンドイチン硫酸レセプター / 抗一接着活性 |
|---|
| 研究概要 |
プロテオグリカン、PG-Mは、Ca^<2+>依存的にそのコンドロイチン硫酸鎖に結合する細胞表面レセプター様分子、annexin VIを介したシグナル伝達系により抗-接着活性を示すとの仮説のもとに、以下の2点から検証を進めた。1)PG-Mの抗-接着活性部位の研究から開発に成功した新分子、コンドロイチン硫酸-リピドを用いて、細胞と基質分子との相互作用を見る点接着アッセイと接着後の細胞の伸展の様子(細胞内骨格系の変化)をみる細胞伸展アッセイの二つの方法により、抗-接着反応を解析した。調べた限りのどの細胞も、コンドイチン硫酸-リピドが共存する場合に限ってフィブロネクチン基質には点接着しかできず、細胞伸展には至らない。コンドロイチン硫酸-リピドのみの基質には、点接着できる。しかし、annexin VIの発現欠損株であるヒト上皮細胞A431は、コンドイチン硫酸-リピド基質への点接着も困難であった。他のグリコサミノグリカン-リピド基質へは、調べた限りの細胞は、A431細胞も含めて、点接着し、やがて伸展した。以上から、annexin VIからのシグナル伝達による細胞伸展反応の抑制機構の存在が示唆された。この特異なシグナル伝達系について様々なプロテインキナーゼ阻害剤および活性剤、カルシウムイオノフォアなどを添加し影響を観察したが、有意なものはみつからなかった。2)PG-Mの示す抗-接着活性の活性部位であるコンドロイチン硫酸鎖の結合本数の異なるスプライスフォームを細胞に強制発現させ、細胞形態や運動性などの変化を解析した。また、PG-M(V3)を異常発現するトランスジェニックマウスの作製を作成し、その性状を解析した。両系ともに、発現量自体が少ないためか期待する変化は今のところ観察されなかった。現在、プロモーターに改良を加えて強力な発現を可能にし、再実験を行っている。
|
