| 研究課題/領域番号 |
08458198
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
機能生物化学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
大熊 芳明 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (70192515)
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| 研究分担者 |
前川 隆文 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (90273721)
益谷 央豪 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (40241252)
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| 研究期間 (年度) |
1996 – 1997
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| 研究課題ステータス |
完了 (1997年度)
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| 配分額 *注記 |
7,600千円 (直接経費: 7,600千円)
1997年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1996年度: 5,700千円 (直接経費: 5,700千円)
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| キーワード | RNAポリメラーゼII(PolII) / 転写開始複合体 / 遺伝子発現 / 基本転写因子 / TFIIE / TFIIH / CAK / 細胞周期 / CTDキナーゼ / CDK4 / 転写 / キナーゼ |
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| 研究概要 |
真核生物では、RNAポリメラーゼII(PolII)により遺伝子がmRNAへと転写されることが、遺伝子発現の第一ステップである。PolIIは、5種類の基本転写因子の助けで転写を行なう。基本転写因子TFIIEとTJIIHは、転写開始複合体に最終段階で加わり、複合体の安定化、活性化を行なって転写を開始させ、伸長段階への移行でも、転写開始複合体の解離と伸長複合体の形成に関与する。TFIIEは、2つのサブユニットTFIIEαとTFIIEβがα2β2の4量体を形成している。各サブユニットは、独立に大腸菌で発現でき、可溶性画分にくる。そこで、TFIIEβに欠失変異を作成し、大腸菌で発現後、精製し、基本転写に必要な領域、TFIIEαとの結合領域、他の基本転写因子TFIIB、TFIIFβとの結合領域を同定して、これらがTFIIHのCTDキナーゼ活性の促進にも重要なことを明らかにした。
一方、TFIIHでは、精製したTFIIHとその3個のサブユニットで構成される細胞周期調節因子CAKの転写への関与とキナーゼ活性の特異性を比較すると、TFIIHは転写活性を有するのに対し、CAKはこの活性を置き換えられなかった。またキナーゼ活性もTFIIHはPolIIのCTDを基質としてリン酸化し、サイクリン依存性キナーゼCDK4はリン酸化できないのに対し、CAKはその反対で、CTDはリン酸化できず、CDK4をリン酸化した。現在、これら両因子の細胞周期への関与、DNA修復異常の患者に見出されたTFIIHのXPBとXPDサブユニットに変異を有するTFIIHを精製し、転写や細胞周期制御への影響を調べている。
以上我々は、キナーゼ活性による転写と細胞周期の特異的調節の重要性を明確にした。また、各キナーゼ活性は異なり、何らかのメカニズムでTFIIHの活性スイッチが切り替わることで、うまく調節されることが示された。
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