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シャペロニンを用いたタンパク質のin vitro及びin vivioの安定化

研究課題

研究課題/領域番号 08555205
研究種目

基盤研究(A)

配分区分補助金
応募区分展開研究
研究分野 生物・生体工学
研究機関京都大学

研究代表者

今中 忠行  京都大学, 工学研究科, 教授 (30029219)

研究分担者 愛水 重典  東洋紡(株), 敦賀バイオ研究所, 所長
高木 昌宏  大阪大学, 大学院・工学研究科, 助教授 (00183434)
研究期間 (年度) 1996 – 1997
研究課題ステータス 完了 (1997年度)
配分額 *注記
11,300千円 (直接経費: 11,300千円)
1997年度: 2,700千円 (直接経費: 2,700千円)
1996年度: 8,600千円 (直接経費: 8,600千円)
キーワード超好熱菌 / 進化 / ゲノム / Pyrococcus / RNAポリメラーゼ / 分子シャペロニン / 窒素代謝 / 真核生物
研究概要

【1】超好熱菌由来シャペロニンタンパク質の性格づけ
我々は既に、超好熱菌Phyrococcus sp.KOD1由来シャペロニンタンパク質をコードする遺伝子を解析し、1641base(547アミノ酸)の配列を明らかにした。さらに菌を宿主として、シャペロニンタンパク質を大量に取得し、精製する手法も確立した。精製されたシャペロニンを用いて、活性(ATPase活性を示す、熱安定性、有機溶媒に対する安定性等について解析した。ATPase活性は95℃で最高値を示した。
【2】酵素熱安定化効果
酵母アルコール脱水素酵素に対する、熱安定化効果について検討した。シャペロニンと酵素の共存状態における熱安定化に及ぼすATPの影響、要求性についても解析した。高濃度のシャペロニンが存在するとATP無添加でも酵素を安定化するという興味ある現象を発見した。
【3】細胞内同時発現によるフォールディング促進効果
細胞内における遺伝子産物のフォールディングについて解析する。きこでは、高発現ベクターにより大腸菌を宿主として生産させたモノクローナル抗体遺伝子とシャペロニン遺伝子とを、それぞれ同じ強さのプロモーターの下流に連結し、同一プラスミドベクターにダンデムに連結し、双方を大腸菌内で高発現させて、細胞内における遺伝子組換え産物のフォールディングを適切に行い、インクルージョンボディー形成が制御された。この現象は調べた外来タンパク質の全てに適用可能であった。

報告書

(3件)
  • 1997 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1996 実績報告書
  • 研究成果

    (40件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (40件)

  • [文献書誌] FUJIWARA, S.et al: "The World of archaea : genomu analusis,evolution and thermostable enzumes" Gene. 179. 165-170 (1996)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] FUJIWARA, S.et al: "Unusual enzyme characteristics of aspartyl-tRNA synthetase from hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1" FEBS Lett.394. 66-70 (1996)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] TACHIBANA, Y.et.al: "Cloning and expressiongof ghe α-amylase gene from hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1 and characterization of the enzyme" J.Ferment.Bioeng.82・3. 224-232 (1996)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] YAN, Z。et al.: "In vitro stabilization and in vivo solubilization of foreign proteins by the β-subunit of a chaperonin from the hyperthermophilic archeon Pyrococcus sp.strain KOD1" Appl.Environ.Microbiol.63・2. 785-789 (1997)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] RHAMAN R.N.A.et al.: "Gene cloning and sequence analysis of cobyric acid synthase and cobalamin (5-phosphate) synthase from hyperthermophilic archaeon pyrococcus sp.KOD1" J.Ferment.Bioeng.83・5. 109-112 (1997)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] SIDDIQUI M.A.et al: "Indolepyruvate ferredoxin oxidoreductase from pyrococcus sp.KOD1 possesses a mosaic structure showing features of oxidoreductases" Mol.Gen.Genet.254. 433-439 (1997)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] JONGSAREEJIT, B.et al.: "Gene cloning,sequencing and enzymatic properties of glutamate synthase from the hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1" Mol.Gen.Genet.254. 635-642 (1997)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 今中 忠行 ら: "超好熱菌シャペロニンのin vivo及びin vitroでの効果" 化学と生物. 34・11. 707-709 (1996)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 今中 忠行 ら: "特殊環境下の微生物とその応用" 化学工学. 60・11. 822-824 (1996)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 今中 忠行 ら: "超好熱菌と耐熱性酵素" 応用酵素協会誌. 31. 1-8 (1996)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 今中 忠行 ら: "超好熱菌の耐熱性酵素" 油化学会誌. 45・5. 43-51 (1997)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Fujiwara, S., et.al: "The World of archaea : genomu analysis, evolution and thermostable enzymes" Gene. Vol.179. 165-170 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Fujiwara, S., et.al: "Unusual enzyme characteristics of aspartyl-tRNA Synthetase from Hyperthermophilic Archaeon Pyrococcus sp.KOD1" FEBS.Lett. Vol.394. 66-70 (1996)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tachibana, Y,et.al: "Cloning and expressing of the alpha-amylase gene from hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1 and characterization of the enzyme" J.Ferment.Bioeng. vol.82 : 3. 224-232 (1996)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yan, Z., et.al: "In vitro stabilization and in vivo solubilization of foreign proteins by the beta-subunit of a chaperon from the hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.strain KOD1" Appl.Environ.Microbiol. Vol.63 : 2. 785-789 (1997)

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      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Rhaman, R.N.A., et.al: "Gene cloning and sequence analysis of cobyric acid synthase and cobalamin (5-phosphate) synthase from hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1" J.Ferment.Bioeng. vol.83 : 5. 109-112 (1997)

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    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Siddiqui, M.A., et.al: "Indolepyruvate ferredoxin oxidoreductase from Pyrococcus sp.KOD1 possesses a mosaic structure showing features of oxidoreductases" Mo1.Gen.Genet. vol.254. 433-439 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Jongsareejit, B., et.al: "Gene cloning, sequencing and enzymatic properties of glutamate synthase from the hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1." Mo1.Gen.Genet. Vol.254. 635-642 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] FUJIWARA,S.et al: "The World of archaea : genomu analusis,evolution and thermostable enzumes" GENE. 179. 165-170 (1996)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] FUJIWARA,S.et al: "Unusual enzyme characteristics of aspartyl-tRNA synthetase from hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1" FEBS Lett.394. 66-70 (1996)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] TACHIBANA,Y.et al: "Cloning and expressionof the d-amylase gene from hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1 and characterization of the enzyme" J.Ferment.Bioeng.82・3. 224-232 (1996)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] YAN,Z。et al.: "In vitro stabilization and in vivo solubilization of foreign proteins by the β-subunit of a chaperonin from the hyperthermophilic archeon Pyrococcus sp.strain KOD1" Appl.Environ.Microbiol.63・2. 785-789 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] RHAMAN R.N.A.et al.: "Gene cloning and sequence analysis of cobyric asid synthase and cobalamin (5-phosphate) synthase from hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1" J.Ferment.Bioeng.83・5. 109-112 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] SIDDIQUI M.A.et al: "Indolepyruvate ferredoxin oxidoreductase from Pyrococcus sp.KOD1 prossesses a mosaic structure showing features of oxidoreductases" Mol.Gen.Genet.254. 433-439 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] JONGSAREEJIT,B.et al.: "Gene cloning,sequencing and enzymatic properties of glutamate synthase from the hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1" Mol.Gen.Genet.254. 635-642 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] 今中忠行ら: "超好熱菌シャペロニンのin vivo及びin vitroでの効果" 化学と生物. 34・11. 707-709 (1996)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] 今中忠行ら: "特殊環境下の微生物とその応用" 化学工学. 60・11. 822-824 (1996)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] 今中忠行ら: "超好熱菌と耐熱性酵素" 応用酵素協会誌. 31. 1-8 (1996)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] 今中忠行ら: "超好熱菌と耐熱性酵素" 油化学会誌. 45・5. 43-51 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Fujiwara,S.et al: "The world of archaea : genomu analysis,evolution and thermostable enzymes" Gene. 179. 165-170 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Fujiwara,S.et al.: "Unusual enzyme characteristics of aspartyl-tRNA synthetase from hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1" FEBS Lett.394. 66-70 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Tachibana,Y.et al.: "Cloning and expression of the α-amylase gene from hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1 and characterization of the enzyme" J.Ferment.Bioeng.82・3. 224-232 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Yan,Z.et al.: "In vitro stablization and in vivo solubilization of foreign proteins by the β subunit of chaperonin from the hyperthermophilic archeon Pyrococcus sp.strain KOD1" Appl.Environ.Microbiol.63・2. 785-789 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Rahman R.N.A.et al.: "Gene cloning and sequence analysis of cobyric acid synthase and cobalamin (5-phosphate synthase from hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1" J.Ferment.Bioeng.83・1. 109-112 (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Siddiqui M.A.et al.: "Gene cloning,sequencing and enzyme characterization of Indolepyruvate ferredoxin oxidoreductase from the hyperthemophic archaeon Pyrococcus sp.KOD1" Mol.Gen.Genet.(印刷中). (1997)

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      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Jongsareejit,B.et al.: "Gene cloning,sequencing and enzyme proerties of glutamate synthase from the hyperthermophilic archaeon Pyrococcus sp.KOD1" Mol.Gen.Genet.(印刷中). (1997)

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      1996 実績報告書
  • [文献書誌] 今中忠行ら: "超好熱菌シャペロニンのin vivo及びin vitroでの効果" 化学と生物. 34・11. 707-709 (1996)

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  • [文献書誌] 今中忠行ら: "特殊環境下の微生物とその応用" 化学工学. 60・11. 822-824 (1996)

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  • [文献書誌] 今中忠行ら: "超好熱菌と耐熱性酵素" 応用酵素協会誌. (印刷中). (1997)

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      1996 実績報告書
  • [文献書誌] 今中忠行ら: "超好熱菌の耐熱性酵素" 油化学会誌. (印刷中). (1997)

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公開日: 1996-04-01   更新日: 2016-04-21  

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