| 研究課題/領域番号 |
08558074
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
機能生物化学
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
蛯名 洋介 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 教授 (00112227)
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| 研究分担者 |
朝日 美彦 大塚製薬株式会社, 徳島研究所, 研究員
岸 和弘 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 助手 (70284320)
林 日出喜 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 助教授 (10218589)
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| 研究期間 (年度) |
1996 – 1997
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| 研究課題ステータス |
完了 (1997年度)
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| 配分額 *注記 |
13,800千円 (直接経費: 13,800千円)
1997年度: 5,200千円 (直接経費: 5,200千円)
1996年度: 8,600千円 (直接経費: 8,600千円)
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| キーワード | 糖尿病薬 / グルコーストランスポーター / 糖尿病 / GLUT4トランスロケーション / 非アイソトープ測定 / 三量体Gタンパク |
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| 研究概要 |
我が国には薬500万人以上の糖尿病患者がおり、人類がかかえる最も頻度の高い遺伝病の一つである。最近、4大疾患の一つに指定され、その対策が緊急の課題となっている。この治療にはインスリン注射に代わる卓越した経口血糖降下剤はなく、その開発が強く望まれている。インスリンは標的細胞である、筋肉、脂肪組織などにおいてインスリン反応性グルコースポータータイプ4(GLUT4)を細胞内の膜分画から細胞膜表面上に移行(トランスロケーション)することにより、細胞内外のグルコース濃度勾配に従ってグルコースの取り込みを促進する。もしGLUT4のトランスロケーションを簡便かつ定量的に検出する方法があれば糖尿病薬のスクリーニングに利用できる。c-mycエピトープ(14アミノ酸)からなるペプチドをコードした合成DNAをGLUT4 cDNA上の第一番目の細胞外ループに挿入し、それを細胞で発現させた。このGLUT4mycキメラタンパクはインスリン刺激で内在性のGLUT4と同様にトランスロケーションもするし、糖の取り込みも促進する。またこのトランスロケーションはc-mycエピトープに対する抗体による細胞表面上でも結合により簡単に定量系に検出することが可能となった。我々はCHO細胞、L6筋肉細胞と3T3L1細胞(ホルモンで脂肪細胞を分化させることができる)にGLUT4mycが安定に発現しているクローンをそれぞれ数種類ずつ得ている。従来までは24wellプレートで^<125>I-ラベルの抗体を用いGLUT4mycのトランスロケーションを定量していたが、96wellプレートを用い非アイソトープ的にassayが可能となり、現在数社がこの方法を用い新規糖尿病薬のスクリーニングを進めている。
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