| 研究課題/領域番号 |
08660111
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
応用微生物学・応用生物化学
|
|---|
| 研究機関 | 鳥取大学 |
|---|
研究代表者 |
和泉 好計 鳥取大学, 工学部, 教授 (40026555)
|
|---|
| 研究分担者 |
大城 隆 鳥取大学, 工学部, 助手 (00233106)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1996
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
|
| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1996年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
|
|---|
| キーワード | メチロトローフ / セリン経路 / イソクエン酸リアーゼ / Hyphomicrobium属細菌 |
|---|
| 研究概要 |
今年度の研究実績は次のようにまとめられる.
メタノール資化経路の一つであるセリン経路はイソクエン酸リアーゼ(ICL)の有無によってicl^+セリン経路とicl^-セリン経路に分類されている。これまで、Hyphomicrobium属細菌はicl^-セリン経路を有すると考えられてきたが、我々は非常に不安定なICL活性がすべてのHyphomicrobium属細菌に分布することを明らかにしてきた。本研究ではL-セリン生産菌のH.methylovorum GM2よりICLを精製し、その諸性質について検討した。
標準緩衝液(リン酸カリウム緩衝液、pH7.0)に10%グリセロールを添加することにより本酵素活性の安定化を試み、メタノールを単一炭素源として生育したH.methylovorum GM2の菌体を超音波破砕後、硫安分画(30-60%)、各種カラムクロマトグラフィーを用いてICLを精製した。本酵素はpH7.5、40℃で最大活性を示し、サブユニット分子量は62,000Daであった。また本酵素活性は他起源ICLと同様にMg2+要求性であり、コハク酸によって強く阻害された。本酵素のN末端アミノ酸配列と他起源ICLの一次構造を利用し、PCR法によってICL遺伝子の一部を得た.この遺伝子断片をプローブとして本酵素遺伝子のクローニングに成功した。
|
