クロレラの耐凍性発現遺伝子の導入による耐凍性パン酵母の作出

• 研究課題/領域番号: 08660164
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 食品科学・製品科学
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 本城 賢一 九州大学, 農学部, 助手 (00264101)
• 研究分担者: 宮本 敬久 九州大学, 農学部, 助教授 (70190816) ; 波多野 昌二 九州大学, 農学部, 教授 (30038260)
• 研究期間 (年度): 1996 – 1997
• 研究課題ステータス: 完了 (1997年度)
• 配分額: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円); 1997年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円); 1996年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
• キーワード: クロレラ / 酵母 / 耐凍性 / LEA蛋白質

研究概要

クロレラの耐凍性獲得時に誘導され,LEA(Late Embryogenesis Abundant)蛋白質をコードするhiC6遺伝子を(pYES2;gal1プロモーター)にサブクローニングし,実験酵母(Saccharomyces cerevisiae INVSc)に導入し,LEA蛋白質発現酵母の生残率は非発現酵母と比べ,約3.3倍(20%から66%)に高められたことについて8年度報告した.9年度は耐凍性の更なる強化を目的にして,耐凍性獲得に関与していると考えられるクロレラのG6PDH遺伝子と膜の脂肪酸の不飽和化酵素遺伝子の単離を試みた.他の生物のG6PDH遺伝子およびω-3脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の配列を基にそれらの保存領域の部分に相当するオリゴヌクレオチドプライマーを合成した.PCR法によりそれぞれの遺伝子の保存領域の増幅のため,耐凍性獲得時のクロレラからmRNAを調製し,cDNAを作成した.そのcDNAを鋳型とし、それぞれの遺伝子をPCRで増幅した.それぞれの遺伝子断片の大きさは270bp.(g6pdh),900.bp(ω-3脂肪酸不飽和化酵素遺伝子)であり,塩基配列決定用のベクターにサブクローニングし,塩基配列決定を行った.得られた断片は相同性検索の結果,目的の遺伝子の一部であることが明らかになった.今後,それぞれの断片を用い,cDNAライブラリーから目的の遺伝子の単離を試み,さらに酵母への導入を図る.