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Cカイネースによる細胞膜Naチャネルdown-regulationの細胞内機序

研究課題

研究課題/領域番号 08670117
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 薬理学一般
研究機関宮崎医科大学

研究代表者

和田 明彦  宮崎医科大学, 医学部, 教授 (30131949)

研究分担者 山本 隆一  宮崎医科大学, 医学部, 助手 (10094111)
小林 英幸  宮崎医科大学, 医学部, 助教授 (40148953)
研究期間 (年度) 1996
研究課題ステータス 完了 (1996年度)
配分額 *注記
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1996年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
キーワードSodium channel / Down-regulation / C kinase isoform / Western blot / Northern blot / Binding / Internalization / Gene expression
研究概要

ウシ副腎髄質細胞(発生学的に神経堤に由来する)の培養系において、細胞膜Naチャネルのdown-regulation(平成7年度報告)に関与するCカイネース(PKC)の分子種を同定し、さらに、その細胞内機序を検討した。
1.副腎髄質細胞には、PKCファミリーの内、α、ε、ζのみが存在することをウエスタン・ブロットで示した。PKC活性薬TPA、PDBu処理により、α、εは細胞質より膜分画に速やかに移行し、15時間後においても膜に結合していた。
2.TPA、PDBuは、濃度および時間依存的に、細胞表面^3H-サキシトキシン結合のB_<max>を減少(K_dは不変)させたが、これは薬物処理15時間後に最低値に達した。
3.ノザン・ブロットでは、TPA、PDBu処理1時間後に、NaチャネルαサブユニットmRNAレベルは低下し始め、6時間後に最低値に達したが、他方、βサブユニットmRNAはむしろ増加した(生物学的に不活性な4α-TPAは効果がなかった)。TPAの濃度-作用曲線は、^3H-サキシトキシン結合低下のそれと一致した。TPAの作用は、PKC阻害薬、さらに、蛋白合成阻害薬により阻止された。TPA存在下では、αサブユニットmRNAの半減期は著しく短縮した。
4.Go6976(PKCα、βの選択的阻害薬)、thymeleatoxin(PKCα、β、γの特異的活性薬)を用いて、(1)αサブユニットmRNAの不安定化にはPKCεが、また、(2)細胞表面Naチャネルdown-regulationには、PKCαが関与していることを、明らかにした。

報告書

(1件)
  • 1996 実績報告書
  • 研究成果

    (8件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (8件)

  • [文献書誌] Toshihiko Yanagita: "Protein kinase C-mediated down-regulation of voltage-dependent sodium channels in adrenal chromaffin cells." Journal of Neurochemistry. 66.3. 1249-1253 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Toshihiko Yanagita: "Differential regulation of sodium channel α- and β-subunit mRNAs by protein kinase C activation in adrenal chromaffin cell." 26th Annual Meeting of Society for Neuroscience. 22.part1. 57- (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Toshihiko Yanagita: "Voltage-dependent Na channel mRNA in cultured bovine adrenal medullary cell." Japanese Journal of Pharmacology. 71.SupplI. 69p- (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Tomoaki Yuhi: "Dual-regulation of voltage-dependent Na channels by cyclic AMP and TPA in adrenal medullary cells." Japanese Journal of Pharmacology. 71.SupplI. 159p- (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] 柳田 俊彦: "電位依存性Na^+チャネル遺伝子の発現調節機構-副腎髄質クロム親和細胞での検討" 岡崎国立生理研平成8年度研究会「クロム親和細胞の刺激-分泌連関とその分子機構」. (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Toshihiko Yanagita: "Protein kinase C α and ε differentially down-regulate voltage-dependent sodium channel mRNAs and their cell surfeced expression in adronal chromaffin cell." 9th International Symposium on Chromaffin Cell Biology. (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Toshihiko Yanagita: "Post-transcriptional dwon-regulation of voltage-dependent sodium channel α-subunit mRNA by protein kinase C in adrenal medulla." 16th Biennial Meeting of International Society for Neurochemistry. (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Toshihiko Yanagita: "Down-regulation of Na channel α-subunit mRNA by protein kinase Cε in adrenal chromaffin cell." Japanese Journal of Pharmacology. 73.SupplI. 157- (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書

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公開日: 1996-04-01   更新日: 2016-04-21  

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