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ステロイド受容体各ドメインの遺伝子産物と核内受容体結合蛋白によるシグナル伝達調節

研究課題

研究課題/領域番号 08670157
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 医化学一般
研究機関聖マリアンナ医科大学

研究代表者

岡本 一起  聖マリアンナ医科大学, 医学部, 講師 (40177085)

研究期間 (年度) 1996 – 1998
研究課題ステータス 完了 (1998年度)
配分額 *注記
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1998年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
1997年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1996年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
キーワードグルココルチコイド / 受容体 / 核結合調節因子群 / 標的遺伝子 / ヌクレオソーム / グリココルチコイド
研究概要

リガンド依存性転写調節因子の一つであるグルココルチコイド・レセプター(GR)は、クロマチン上で普遍的転写因子や転写調節蛋白質と複雑な蛋白-蛋白相互作用を行っている。GR蛋白質は、C末端側のリガンド結合ドメイン、DNA結合ドメイン、N末端側ドメインから構成されている。このうち、N末端側ドメインはGR蛋白の外郭を構成し、種々の核内蛋白質との相互作用に関与していると考えられるが、その正確な働きは不明である。申請者は、精製GR蛋白と核やクロマチン、DNAとの結合アッセイ系を開発し、GR核結合促進因子(ASTP)とGR核結合阻害因子(MTI-I,-II,-III)を発見し、精製した。促進因子ASTPについては、そのcDNAをクローニングし、一次構造を決定した。ASTPはGRと共にコア-ヒストンを構成するヒストンH3,H4に強固に結合することを見い出した。阻害因子MTI-IIIは、GR結合蛋白質で、DNA結合だけでなく、ヒストン結合をも阻害した。GR蛋白の各ドメインが、GRE領域を含むDNAや促進因子、阻害因子群とヌクレオソーム上でどのように相互作用するかを解析する為には、GR各ドメイン蛋白質を多量にかつ高度に精製する必要がある。平成8年度は、GR蛋白の各ドメインをコードするcDNAをRT-PCR法を用いてクローニングを行なった。平成9年度は、クローニングしたGR各ドメインcDNAをGlutathion S-Transferase(GST)発現プラスミドベクターに組み込み、GST融合GR蛋白を大腸菌内で発現させ、Glutathionアフィニティクロマトで、GR各ドメイン蛋白質を精製した。この大腸菌の発現システムでは、蛋白リン酸化等の修飾のない遺伝子産物が得られた。平成10年度は、バキュロウイルス発現系を用いて、修飾された遺伝子産物の発現を行った。

報告書

(4件)
  • 1998 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1997 実績報告書
  • 1996 実績報告書
  • 研究成果

    (27件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (27件)

  • [文献書誌] Okamoto, K.: "Cloning and Expression of Rat Glucocorticoid-Receptor DNA-Binding Domain" Biofactors. (in press). (1999)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ohta, T.: "T-Loop Delection of CDC2 from Breast Cancer Tissues Eliminates Binding to Cyclin B1 and Cyclin-dependent Kinase Inhibitor p21" Cancer Research. 58・6. 1095-1098 (1998)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Shibata, K.: "Cloning of Nuclear Receptor Superfamily Glucocorticoid Receptor cDNA with Polymerase Chain Reaction" 石巻専修大学 研究紀要. 8. 59-64 (1997)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Suematsu, N.: "Effects of Various Proteins or Peptides on Reactivation of Cold-Inactivated Acetyl-Co Ahydrolase from Rat Liver" St.Marianna Medical Jounal. 24・6. 691-697 (1996)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Suematsu, N.: "Evaluation of Various Purification Methods for Fluorescent Extension Products of DNA Sequencing Reaction" St.Marianna Medical Jounal. 24・5. 565-557 (1996)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Okamoto, K.: "Effect of Macromolecular-Translocation Inhibitor-III on Binding of Activated Glucocorticoid-Receptor Complex to Specific DNA" Jounal of Biochemistry. 119・5. 920-925 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Okamoto, K.: "Cloning and Expression of Rat Glucocorticoid-Recept or DNA-Binding Domain" Biofactors. (in press). (1999)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ohta, T.: "T-Loop Delection of CDC2 from Breast Cancer Tissues Eliminates Binding to Cyclin B1 and Cyclin-dependent Kinase Inhibitor p21" Cancer Research. 58-6. 1095-1098 (1998)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Shibata, K.: "Cloning of Nuclear Receptor Superfamily Glucocorticoid Receptor cDNA with Polymerase Chain Reaction" Bulletin of Ishinomaki Senshu University. 8. 59-64 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Suematsu, N.: "Effects of Various Proteins or Peptides on Reactivation of Cold-Inactivated Acetyl-CoA hydrolase from Rat Liver" St.Marianna Medical Jounal. 24-6. 691-697 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Suematsu, N.: "Evaluation of Various Purification Methods for Fluorescent Extension Products of DNA Sequencing Reaction" St.Marianna Medical Jounal. 24-5. 557-565 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Okamoto, K.: "Effect of Macromolecular-Translocation Inhibitor-III on Binding of Activated Glucocorticoid-Receptor Complex to Specific DNA" Jounal of Biochemistry. 119-5. 920-925 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Okamoto,K.: "Cloning and Expression of Rat Glucocorticoid-Receptor DNA-Binding Domain" Biofactors. (in press). (1999)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Ohta,T.: "T-Loop Deletion of CDC2 from Breast Cancer Tissues Eliminates Binding to Cyclin B1 and Cyclin-dependent Kinase Inhibitor p21" Cancer Research. 58・6. 1095-1098 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Shibata,K.: "Cloning of Nuclear Receptor Superfamily Glucocorticoid Receptor cDNA with Polymerase Chain Reaction" 石巻専修大学 研究紀要. 8. 59-64 (1997)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Suematsu,N.: "Effects of Various Proteins or Peptides on Reactivation of Cold-Inactivated Acetyl-CoA hydrolase from Rat Liver" St.Marianna Medical Jounal. 24・6. 691-697 (1996)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Suematsu,N.: "Evaluation of Various Purification Methods for Fluorescent Extension Products of DNA Sequencing Reaction" St.Marianna Medical Jounal. 24・5. 565-557 (1996)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Okamoto,K.: "Effect of Macromolecular-Translocation Inhibitor-III on Binding of Activated Glucocorticoid-Receptor Complex to Specific DNA" Jounal of Biochemistry. 119・5. 920-925 (1996)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Okamoto,K.: "Cloning and Expression Vector of Rat Hepatic Glucocorticoid-Receptor" 3rd International Congress on Vitamins and Related Biofactors. in press. (1998)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Suematsu,N.: "Enhancement of Reactivation of Cold-inactivated Acetyl-CoA Hydrolase from Rat Liver Cytosol with Triton X-100" FAOBMB. PR62 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Isohashi,F.: "Interference of Macromolecular-Translocation Inhibitor-III in the Binding of Activated Glucocorticoid-Receptor Complex to Specific DNA." 17th International Congress of Biochemistry and Molecular Biology. A923 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Shibata,K.: "Cloning of Nuclear Receptor Superfamily Glucocorticoid Receptor cDNA with Polymerase Chain Reaction." 石巻専修大学 研究紀要. 8. 59-64 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Okamoto,K.: "Effect of Macromolecular-Translocation-Inhibitor-III on Binding of Activated Glucocorticoid-Receptor Complex to Specific DNA." J.Biochem.119・5. 920-925 (1996)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Okamoto,K.: "Effect of Macromolecular-Translocation Inhibitor-III on Binding of Activated Glucocorticoid-Receptor Complex to Specific DNA." J. Biochem.119. 920-925 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Okamoto,K.: "Purification and Characterization of Rat Hepatic Macromolecular-Translocation Inhibitor-III of Activated Glucocorticoid-Receptor Binding to Nuclei and Specific DNA." 12th International Symposium of Federation of Asian and Oceanian Biochemists and Molecular Biologists. 133 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Suematsu,N.: "Evaluation of Various Purification Methods for Fluorescent Extension Products of DNA Sequencing Reaction." St. Marianna Med. J.24. 557-565 (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Suematsu,N.: "Effects of Various Proteins or Peptides on Reactivation of Cold-Inactivated A cetyl-CoA hydrolase from Rat Liver." St. Marianna Med. J.24(In Press). (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書

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公開日: 1996-04-01   更新日: 2016-04-21  

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