| 研究課題/領域番号 |
08670187
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
病体医化学
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| 研究機関 | (財)冲中記念成人病研究所 |
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研究代表者 |
菅野 仁 財団法人冲中記念成人病研究所, 専任研究員 (70221207)
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| 研究分担者 |
三輪 史朗 財団法人冲中記念成人病研究所, 所長 (40034954)
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| 研究期間 (年度) |
1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1996年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
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| キーワード | ピルビン酸キナーゼ / 溶血性貧血 / 赤血球 / モデルマウス / トランスジェニックマウス / 組織特異的発現 / プロモーター / エンハンサー |
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| 研究概要 |
ヒトピルビン酸キナーゼ(PK)遺伝子発現を規定するエレメントを明らかにする目的で二種類のヒトPKミニ遺伝子を構築し、トランスジェニックマウスを作製した。ヒトPK遺伝子発現はマウス骨髄・網赤血球・肝臓・大腿筋RNAを用いて、ヒトR/L型PKmRNAをRT-PCR法により特異的に増幅することで確認した。ヒトL・R型PK全翻訳領域およびイントロン1・2・11に近位のプロモーター配列を結合したコンストラクト1では、マウス各組織にヒトPK遺伝子の発現は認められなかった。一方上記のコンストラクト1に、R型PK転写開始部位より約4kb上流のDNaseI高感受性領域(HSS)を加えたコンストラクト2を用いて得られた系統(PK-20)には、骨髄・網赤血球にヒトR型、肝にL型PKmRNAを検出できた。本来R/L型PK遺伝子発現の無い筋肉ではPKmRNAは検出されなかった。マウス骨髄・網赤血球中のヒトR型RNAは正常のプロセッシングを受け、翻訳領域の塩基配列にも異常が無いことを確認出来たが、PK-20の赤血球・胎児肝にはヒトR型PK活性は検出できなかった。今回の結果により、ヒトPK遺伝子発現の細胞特異性はコンストラクト2に含まれるエレメント、すなわちプロモーターとHSSで規定されるが、導入されたトランス遺伝子の発現量は低く、PK遺伝子の赤血球系細胞における発現レベルを調節する別のエレメントが存在することが示唆された。
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